微柱凝胶法交叉配血假阳性结果的剖析
[摘要]目的寻找应用微柱凝胶法进行交叉配血出现假阳性结果的原因。方法用微柱凝胶法对本院需要输血的患者进行交叉配血,阳性者再用凝聚胺法及抗球蛋白配血法交叉配血后进行比较。结果2537例配血中检测出假阳性14例占0.55%。结论微柱凝胶法进行交叉配血灵敏度高,自动化程度高,但也容易引起假阳性,给交叉配血造成一定的困扰。
[关键词]微柱凝胶;交叉配血;假阳性
微柱凝胶法是近几年刚传入我国的一种用于抗体筛查、交叉配血的方法,该方法标本用量少,灵敏度高,特异性强,操作简单,结果可较长时间保存[1]。我院检验科用微柱凝胶法对2537例患者进行交叉配血,现将结果分析如下。
1材料和方法
111样本来源所选病例为我院需要输血的2537例患者,供血者为南京市血液中心提供的“小辫子”血。
112试剂微柱凝胶配血卡,专用离心机和孵育箱(瀚通公司);凝聚胺试剂(珠海贝索生物技术有限公司),抗球蛋白试剂(上海血液中心)。
113方法
11311微柱凝胶法标记好cellbind血型卡,主侧:45μL受血者血清加2%供血者红细胞悬液45μL;次侧:45μL供血者血清加2%受血者红细胞悬液45μL,37℃孵育15min后专用离心机离心10min,观察结果,红细胞沉积在凝胶管底部者为阴性,红细胞聚集在凝胶带上部为阳性。
11312凝聚胺介质法主管供者2%红细胞悬液2滴加受者血清2滴,次管受者2%红细胞悬液2滴加供者血清2滴,混匀后加低离子溶液0.7mL,混匀再加凝聚胺溶液2滴,3000r/min离心10s,倒掉上清液,轻摇有凝集,再加悬浮液2滴,凝集在1min内散开为阴性,凝集不散开为阳性。
11313抗球蛋白法主侧管受者血清2滴+5%供者红细胞悬液1滴;次侧管5%受者红细胞悬液1滴+供者血清2滴;阳性对照管5%Rh(D)阳性红细胞悬液1滴+IgG抗-D血清2滴;阴性对照管5%O型试剂红细胞悬液1滴+AB型血清2滴;盐水对照1管5%供者红细胞生理盐水悬液1滴+生理盐水2滴;盐水对照2管5%受者红细胞生理盐水悬液1滴+生理盐水2滴。置37℃水浴致敏1h后盐水洗涤红细胞3次,倾去上清液加最适稀释度抗球蛋白血清1滴,混匀,1000r/min离心1min,主次管都不凝集表示输血无禁忌。
2结果
用微柱凝胶法检测出14例次侧管有凝集,用抗球蛋白法和凝聚胺递质法检测均为阴性,后经输注悬浮红细胞后期观察,无不良反应,确定为假阳性。14例假阳性中因为红细胞悬液浓度过高而引起6例,由于纤维蛋白的影响引起3例,因疾病原因引起4例,因冷凝集素引起1例。
3讨论
微柱凝胶法是建立在抗人球蛋白基础上的一种新方法。
在微柱中进行,柱内预先装有凝胶及抗人球蛋白,红细胞与相应的抗体反应后离心,凝集的红细胞被阻滞于柱上层,游离的红细胞见于柱底,结果明确可靠,用肉眼即可判断。微柱凝胶法灵敏度高,特异性强,配血便于自动化,标准化,无需显微镜观察,重复性好,结果稳定,观察直观,易于长期保存。但是在实际操作中,微柱凝胶法也会因为一些因素而引起假阳性。
311标本因素①标本抗凝不充分,血浆中纤维蛋白的干扰或红细胞呈小凝块,在配血中虽没有特异抗原抗体反应,但在离心时,却可以阻止红细胞透过凝胶层而沉淀出现(+)～(6)假阳性,对这种现象采用EDTA真空采血管时要及时充分混匀。②标本离心不充分时,大量的白细胞或血小板聚集形成凝块黏附在凝胶上呈(+)～(6)假阳性,因此离心时2000r/min应离心5min。③红细胞悬液的浓度不适或血浆与血细胞的比例不适引起假阳性。红细胞悬液以生理盐水洗涤后配成2%的浓度最佳[2],吸取红细胞时,应在整个压积红细胞的中间部位吸取,以免吸入上层白细胞、血小板和下层的凝块。
312温度因素微柱凝胶法中,虽然在温箱内孵育15min,可有效消除冷凝集素的影响,但在某些病理情况下(如白血病、支原体肺炎和恶性淋巴瘤等),冷凝集效价明显升高,造成配血中红细胞假凝集。通常冷凝集效价1∶64时即可引起红细胞假凝集[3],因此,配血时孵育时间要充分,并要控制室温。
313疾病或药物因素在配血中发现,一些肿瘤癌症、白血病、慢性肝病患者,交叉配血过程中容易引起假阳性,这是由于反复的输血过程,导致了红细胞表面发生了变化,改变了正常的红细胞表面表达,使得在实验室配血过程中与试剂中含有的IgG,C3溶液发生反应。另外,大量抗生素、止血敏、肝素、云南白药等药物也会干扰配血结果[4]。
因此,在工作过程中一定要多了解患者的病情,多与临床沟通,一定要针对具体原因进行具体分析、判断和处理,从而保证输血安全。
[参考文献]
[1]舒象武.应用微柱凝胶球蛋白技术进行交叉配血[J].中国现代医学杂志,2003,13(13):116-118
[2]杨崇礼,兰炯采,胡利亚.婴儿ABO血型定型的研究[J].中华儿科杂志,1995,33(4):221
[3]李莎,郑山根.柱凝聚技术筛检不规则抗体的初步观察[J].中国输血杂志,1999,12(3):169-170
[4]唐长久,王华,李瑞云,等.微柱凝胶配血次侧不和17例临床分析[J].中国输血杂志,2005,18(1):61
