| 实验步骤 |
一材料与设备
1)8umol/L 顶链
2)8umol/L 底链，5＇末端 2 个核苻酸进行甲氧基修饰
3)20X 缓冲液:800 mmol/LNaCl.20 mmol/L 精胺，100 mmol/LDTT，0.2%TritonX-100(pH8.l)
4)NTP 混合物，各 80mol/L, 用 1mol/LNaOH 调 PH8.1
5)lmol/LNaOH。
6) 聚乙二醇 8000,400 mg/ml。
7)0.5mol/LMgCl2
8)1mol/L 谷氨酸钠 (pH8.l)
9)T7 RNA 聚合酶。
10) 载样缓冲液：8mol/L 尿素，lmmol/LEDTA，0,1% 一甲苯青 FF，0.1% 溴酚蓝
二、操作方法
1) 在灭菌微量离心管中混合下列物质：
8umol/L 顶链 (终浓度 400nmol/L) 1ul
8umol/L 底链（5＇端 2 个核苷 1ul
酸甲氧基修饰，终浓度 400nmol/L)
20X 缓冲液 2ul
NTP 混合物 2ul
聚乙二醇 8000 5ul
0.5mol/LMgCl2 1.12ul
1mol/L 谷氨酸钠 1ul
T7RNA 聚合酶 1ul
加无核酸酶的水至总体积为 20ul
2) 于 37℃ 反应 lh。
3) 加载样液，变件聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化回收，保存于一 20℃
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