酚试剂（Lowry）法测血清蛋白质含量
一、 相关理论
1、 血清（浆）蛋白质是血清（浆）固体成分中含量最多、组成复杂、功能广泛的一类化和物。
2、 血清（浆）蛋白质的分类：
目前已研究的有300 余种，已分离提纯的有100 余种，大部分在肝脏合成。
1） 盐析法可将血浆蛋白分为白蛋白（Albumin, Alb 或
A）和球蛋白（Globulin, G）2 种
2） 醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白分为白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5 种
3） 琼脂糖凝胶电泳可分为13 种
4） 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可分为30 多种
5） SDS-PAGE 可分为300 多种。
3、 血清（浆）蛋白质的功能：
1） 维持血浆渗透压 2）运输作用
3） 营养作用 4）缓冲作用
5）免疫作用 6）凝血作用
7）催化作用
4、 测定蛋白质含量的意义：
1） 实验室测定蛋白浓度可推测蛋白质的总量和纯度
2） 农牧业、食品加工业和发酵工业蛋白质定量分析也是一种重要手段
3） 在医学领域，人体体液中总蛋白质和某些特定蛋白质的测定，可作为疾病诊断治疗和病程观察的重要指标
二、 常用测定方法（总蛋白）
1、 凯氏（Kjeldahl）微量定氮法：
1） 原理：在生物样品中，蛋白质含氮量相对恒定，为16%，即1 克氮相当于6.25 克蛋白质，由于其它非蛋
白质含氮化合物所占的氮量甚微，故可通过测定样品中的含氮量来推算其蛋白质含量。
2） 特点：历史悠久（1883 年），结果较准，但方法复杂、费时。一般不用于常规检测。
2、 双缩脲法：
1） 原理：利用蛋白质肽键在碱性溶液中与Cu++作用产生紫红色络合物（双缩脲反应），在一定范围内，颜色反应强度与蛋白质含量成正比。
2） 特点：简单、精密、准确（干扰因素较少），为首选方法，但灵敏度稍差（最低测定值 100ug）。
3、 酚试剂法：
1） 原理：Folin 1921 年首创，利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试剂（磷钨酸-磷钼酸）起蓝色反应。1951 年，Lowry 对此法进行了改进，先于标本中加碱性铜试剂，再与酚试剂反应，提高了灵敏度。
2） 特点：灵敏度高（最低测定值 1ug），但易受还原性物质的干扰。
4、 紫外分光光度法：
1） 原理：利用蛋白质分子中色氨酸、酪氨酸残基在280nm 由吸收峰，进行比色测定。
2） 特点：灵敏度较高（最低测定值 10ug），操作简单，但仪器价格昂贵，易受其它因素干扰（尿素、胆红素），需将蛋白质分离纯化后再测。
5、 染料结合法：
1） 原理：酸性情况下，带正电的蛋白质与带负电的染料（如考马斯亮蓝G-250）结合呈现一定的颜色。
2） 特点：灵敏度高（最低测定值 1ug），操作简单，干扰因素较少但特异性不高。
三、 实验：酚试剂（Lowry）法测血清（总）蛋白质含量
1、 目的及要求
1） 掌握酚试剂法测血清蛋白质的原理
2） 掌握制作标准曲线的方法
2、 原理
1） 碱性条件下，蛋白质（血清）+铜生成蛋白质-铜复合物
2） 蛋白质-铜复合物使磷钨酸-磷钼酸还原，生成蓝色物质
3、 试剂（略）
4、 操作
1） 血清的稀释（1:500）
2） 标准曲线的制备：按下表操作（单位：ml）
混匀，30min 后，以第1 管为空白管，在650nm 处比色，读取各管光密度，并以其为纵坐标，各管蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
5、 计算
1） 以A 测读数查标准曲线求得血清蛋白质含量
2） 以第6 管为标准管，计算：
6、 注意事项
1） 加入酚试剂时动作要快并立即摇匀，不应出现混浊
2） 标准曲线制备：3、5、7 管平行，各管A 之差不得超过0.005，否则删去，取平均值；最好呈45o 直线。
7、 临床意义
1） 总蛋白增加：血液浓缩（严重腹泻、呕吐、高热、休克）；合成增多（多发性骨髓瘤G）
2） 总蛋白减少
