磁珠法粪便提取试剂盒操作指南
常规样本的核酸提取
想必已不再是实验党们头疼的对象了吧
然鹅，粪便基因组DNA提取步骤实在繁琐
还可能遇到提取浓度低，纯度差等问题
简直天崩地裂啊
没关系，这点小事MP帮你解决!
拿好这份指南
让你的粪便DNA提取实验事半功倍
【 一图了解提取步骤 】
【 PART 01-预洗 】
预洗是杂质去除的关键步骤，由于粪便样本中可能含有多种可溶性杂质，如胆红素、胆汁盐、腐殖酸、植物源性多糖等。对于成分复杂的粪便样本，倘若不进行预洗，这些杂质会在细胞及菌体裂解后，混合在释放的核酸中，并与核酸竞争性结合磁珠，杂质与磁珠结合后，在洗脱时与磁珠分离，导致洗脱的DNA有颜色，纯度低。
预洗操作
1.向Lysing Matrix E管中加入样本，再加入1mL Pre-wash Buffer，用涡旋震荡仪涡旋至粪便样本被完全重悬起来。
2.因粪便状态而异，涡旋时间控制在1min以内，时间过长会导致一部分细胞或菌体破裂，损失一部分DNA。
3.12000rpm，离心5min，弃去上清，保留沉淀。
除了按照预洗操作执行以外，对于各类型的样本也会有不同注意事项：
【 PART 02-裂解与去杂 】
裂解：样本预洗后，向Lysing Matrix E中依次加入裂解液的三种成分：Lysis Buffer F1、Lysis Buffer F2、RNase A，涡旋混匀。
使用FastPrep-24TM 5G研磨仪，5 m/s，研磨40s或用涡旋震荡仪以最大速度涡旋10 min，离心后保留上清液，弃去沉淀。
去杂质：将上清液转移到新的离心管中，添加去杂剂：PPS，主要用于去除蛋白等杂质。在4℃放置5 min能提高效果，离心后，保留上清液，弃去沉淀。
【 PART 03-结合-漂洗-洗脱 】
图 |磁珠法提取
这三个步骤可以手工操作，也可以配合自动化核酸提取仪实现自动化批量操作。一般来说，手工提取预计在40-45 min左右完成，采用MP公司的24孔磁力架（货号 116570413），可以一次处理24个样本。而采用自动化仪器提取，随着样本数量的增加，操作时间并不延长，样品处理量成倍增加，效率大大提高，从此解放双手。
图 |24孔磁力架
手工操作
自动化操作
1. 将400 µL上清液转移至 96 孔板从左至右的第二列中，并按照下表在各添加其他试剂。 
2. 按照下表设置程序，运行自动化核酸提取仪。
