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实验室分享之萌新篇——细胞培养避坑指南

2022.8.03

细胞培养也叫细胞克隆术。是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定的营养条件等），使细胞生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。小趣刚刚接触细胞的时候很慌，每天小心翼翼，生怕哪天它一不高兴就给我“脸色”看。经过多年摸爬滚打，小趣终于成长为一名合格的细胞培养技术员，哈哈！今天，就和大家来聊一聊细胞培养的基本流程。

细胞培养主要涉及细胞的复苏、传代、冻存3个基本流程。其次才是相关的细胞实验（细胞转染、增殖、凋亡、周期、免疫荧光等等），要知道良好的细胞状态才是做好实验的基础。

一、细胞复苏
细胞从哪里来呢？一般细胞株的话从专业的细胞库购买就可以。原代细胞需要从组织进行分离，且原代细胞分离后传代次数非常有限，仅仅几代状态就开始下滑。细胞复苏之前的准备工作至关重要。培养箱、超净台、枪头进行消毒、灭菌处理（小趣使用的是一款可以高温灭菌的培养箱，轻松了很多）。针对细胞准备特定的培养基以及高品质的胎牛血清、双抗；此外就是细胞的“家”了！大家一定注意可不能使用劣质的培养皿/瓶，否则贴壁类的细胞不贴壁。细胞复苏的基本流程已给大家梳理好了。

二、细胞传代

细胞复苏工作完成后，就静待细胞慢慢成长吧，细胞在生长的过程中会消耗营养，产生代谢物，培养液pH会发生变化。因此，建议48h左右进行换液，当培养板里的细胞密度达到90%左右就可以准备传代了。

贴壁细胞常用胰酶消化法。先弃掉上清，用PBS漂洗一次后加入适量的胰酶消化液，刚好覆盖细胞即可。不同细胞的消化时间不同，需要去摸索，第一次操作，可在镜下多观察几次，当细胞与细胞之间间隙明显，形态有变圆的趋势时最理想（FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min）。胰酶消化完成，加入培养基中和胰酶，轻轻吹打收集细胞至离心管，离心去除上清。再次加入新鲜培养基重悬细胞，按照1:1-1:6的比例分到多个培养皿中，补充培养液后放入培养箱即可。

三、细胞冻存

细胞冻存是重中之重，新的细胞一定要进行冻存保种，防止后续细胞传代次数过多、状态差、污染等问题出现时无细胞可用。细胞冻存与传代步骤有相同之处，不同的是消化收集细胞后使用冻存液（90%血清+10%DMSO）重悬细胞，然后分装进冻存管中，转移至冻存盒，-80℃过夜后即可转入液氮长期保存。

细胞的培养过程其实也没有你想象的那么难，把握好细节，离成功就不远了。另外，小趣也总结了一些经验供大家参考学习。如果您有这方面的需求，我们也提供细胞相关的技术服务。