拜泰齐贸易（上海）有限公司
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Flash纯化中，如何建立一个有效的梯度分离方法？
对于化学和药物合成实验而言，大部分的实验流程都是以反应-分析-纯化这个步骤为主线来展开实验研究，通过一步一步合成，最终得到目标产物，每一步反应所设计对应的产物结构都会有所不同，而在这每一步合成反应过程中，大部分都需要对粗产物进行纯化，如何有效的设置纯化条件和梯度方法，使得Flash纯化高效而快速，是非常值得我们思考和探索的。
我们都知道，流动相溶剂的选择以及比例的大小对纯化的影响至关重要，所以Flash方法的设定影响着分离的成败和效率；此次，我将分享一些我自己的经验，告诉大家如何通过TLC点板信息来建立一个可靠高效的Flash梯度方法。
新世纪的到来，实验技术的发展突飞猛进，拥有全自动纯化能力的Flash系统已经成为了合成实验室的纯化主流产品，越来越多的化学家依赖于Isolera系统，手工等度的玻璃柱洗脱显得繁琐复杂而又效率低下。在Isolera系统的帮助下，我们只需要输入对应的一个或者两个TLC点板信息，Isolera会自动生成梯度方法，同时通过您输入的样品纯化量可以推荐您使用的色谱柱规格，从而可以为您节省溶剂，提高速度，判断出峰时间。
那么系统是如何做到这一点的呢？
Isolera系统可以通过线性梯度算法来完成Rf值转换成梯度的过程。
起始梯度部分一：1/4的TLC点板溶剂极性，1柱体积（CV）；
中间梯度部分二：1/4的溶剂极性上升到两倍的TLC点板溶剂极性，持续10柱体积（CV）；
最终梯度部分二：两倍的TLC点板溶剂极性，持续2柱体积（CV）。
这种算法可以保证Rf值在0.1以上的所有样品都可以在13个柱体积之前被洗脱出来，同时系统会根据你的上样量为您推荐合适的色谱柱大小。
TLC to gradient software being used to create a linear gradient and estimate sample loading and cartridge size.
Linear gradient results created from TLC data above; 100 mg sample load on a 10g cartridge.
另一方面，还可以通过台阶式梯度的方法来做梯度转换，和线性梯度转换一样，同样的我们也需要输入对应的Rf值和溶剂极性，这种阶梯式梯度更加依赖于前期的溶剂比例的探索，摸索好最佳的溶剂条件后，往往可以将混合体系中的各个化合物一一取得。
Accurate step gradients can be developed using as few as 2 TLC plates worth of data and a well-designed algorithm.
Resulting step gradient separation from above method shows complete resolution of each compound using a 10 g silica cartridge.
此外，还有第三种算法，是通过确定了特定的产物的Rf值溶剂极性后，先进行梯度洗脱，当目标样品出峰时，点击hold进行等度洗脱，直到样品完全被洗脱出后，再恢复到之前的梯度方法，此方法需要实验人员一直守在机器旁，但是更加灵活方便。
具体使用哪一种算法，取决于你，只要前期的Rf值得条件摸索好，每一种方法都会有一个比较满意的结果。线性梯度方法，简单，高效。但是和阶梯式方法相比，溶剂消耗多一些，载样量也相对少一些；而阶梯式的缺点就在于方法优化相对困难一些，没有线性简单。
对于梯度方法的建立，您是使用什么的方法呢？欢迎和我们交流。
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