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技术控 | 方法开发中调整流动相技巧篇（内含福利）
面对复杂组分的样品方法开发，如何根据不同化合物的pKa调整流动相的PH值可谓技术控们“谈之色变”的一项挑战。
那么本期，我们特别为您汇总了这一篇流动相调整技巧实用贴，让您在方法开发过程中不再犯难！
常见的方法开发技巧通常都有哪些？
01
■对于反相色谱，分析物应该维持中性
■对酸性或碱性化合物，将流动相pH维持在高于或低于分析物pKa的两个pH单位值
■为了延长色谱柱寿命，使用浓度小于20mM的缓冲液
■保持在所用缓冲液所给予的缓冲范围内进行操作
流动相pH值对酸性化合物的影响
流动相pH值对碱性化合物的影响
方法开发的缓冲液如何选择？
02
除了有机溶剂外，缓冲液的选择是HPLC方法开发中重要的参数。选择合适的缓冲液有几个标准。首先是选择拥有和操作环境pH相似pKa的缓冲液。其它的标准，比如离子强度、离子对性质和质谱的相容性，也应该在选择流动相改性剂前考虑。
资料来源：: Practical HPLC Method Development; L.R. Snyder, JJ Kirkland, and JL Glajch. Wiley Interscience, 1997, and Introduction to Protein and Peptide HPLC; TP Bradshaw, Phenomenex, 1998.
† 常用缓冲液为粗体
‡ 低浓度三氟乙酸可以使用于LC/MS应用，但有可能影响灵敏度。
下面是一组通过不同PH缓冲液对酸碱化合物的色谱分离效果实例
色谱柱
Gemini 5μm NX-C18
规格
150 x 4.6mm
货号
00F-4454-E0
流动相
请参见色谱图
梯度
在10分钟内，由A/B(95:5)至(5:95), 并维持2分钟
流速
1.5mL/分钟
温度
室温
检测
UV@254nm
样品：
1.阿米替林
2.萘普生
3.甲苯
样品化合物结构式
通过以上这个案例，我们可以看到流动相PH调整直接影响着不同酸碱性组分的保留和出峰时间。
这里我们也特别为您筛选了一款PH值方法开发包：
流动相PH2-5时，推荐神人系列Synergi hydro（PH稳定性为：1.5-7.5）；
流动相PH6-8时，推荐月神系列Luna C18(2)（PH稳定性为：1.5-9.0）；
流动相PH>8时，推荐双子星系列Gemini C18（PH稳定性为：1.0-12.0）。
福利来啦~~
实验享不停，下单享惊喜！
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活动说明
■以上方法包涉及色谱柱长度，粒径不限；
■色谱柱内径ID限制为2.0, 2.1, 3.0, 4.6；
■优惠不适用于内径≥7.8mm的液相色谱柱以及散装填料；
■单笔订单中只能包含其中一种活动方法包；每个方法包必须按照指定产品下单，不能拆包购买；
■以上活动价格均为含税价格；
■所有满足条件的订单，需在订单上注明促销代码CN20CAT。
活动时间
2020年4月27日-5月29日
条款条件
■本活动仅限终端用户参与；
■优惠仅限终端用户使用，且产品订单直发终端客户
