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干货 | 邻苯的固相萃取检测方法大礼包

安谱实验

2021.6.16

食品安全一直是大家密切关注的热点问题，其中的致癌、致畸变的邻苯检测更是突出，亟需解决。针对邻苯的理化特性和检测难点，安谱实验给出了一套完整的邻苯在包括环境水、牛奶、油炸食品等基质中的检测方法，助力各检测实验室中邻苯的检测项目的顺利实施。

一、邻苯的特性

邻苯二甲酸酯是一种使用范围广、性能好、廉价的聚氯乙烯增塑剂，它可使聚氯乙烯由硬塑胶变为有弹性的塑胶，起到增塑剂的作用。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品（如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等数百种产品中。

二、化学式

三、危害

邻苯致癌、致畸变，长期高浓度接触可导致神经系统受损。

四、邻苯的理化参数

五、不同基质邻苯检测方案

1、基质：水

SPE：C8、C18

预处理：2*6mL甲醇，3*6mL水

上样：100-1000mL

洗涤：6mL水

干燥：7min

洗脱：3*0.5mL甲醇（乙腈、乙酸乙酯）

2、基质：水

SPE：HLB

预处理：6ml乙醚/甲醇（95：5），6mL甲醇，6mL水

上样：1L，流速5mL/min

洗涤：5mL水/甲醇（95：5）

干燥：3-5min

洗脱：9mL 乙醚/甲醇（95：5）

3、基质：牛奶

SPE：PSA

提取：

称取2g牛奶样品于玻璃离心管中，分别加入2mL甲醇、10mL正己烷/甲基叔丁基醚（1:1)，

混合均匀3min，4000r/min离心2min，取上清液，再加入10mL正己烷/甲基叔丁基醚（1:1)重复提取一次，合并两次上清液，40℃氮吹近干，2mL正己烷定容混匀，待净化。

净化：

活化：小柱加入1g无水硫酸钠，5mL丙酮、5mL正己烷

上样：净化液，流速1mLmin

洗脱：5mL正己烷、5mL 4%丙酮-正己烷，收集上样-洗脱，40摄氏度吹到0.5mL，缓慢挥干，乙腈定容1mL，HPLC或者GCMS检测。

4、基质：食用油

SPE：PSA

提取：

称取0.2g样品于玻璃具塞管，加入5mL乙腈，涡旋2min、超声2min，4000RPM/min

硫酸2min，将上清液转移到玻璃管中，40℃氮吹近干，加入2mL正己烷，振荡混匀、待净化。

净化：

活化：5mL丙酮、5mL正己烷

上样：净化液，流速1mLmin

洗脱：5mL正己烷、5mL 4%丙酮-正己烷，收集上样-洗脱，40摄氏度吹到0.5mL，缓慢挥干，乙腈定容1mL，HPLC或者GCMS检测。

5、基质：油脂食品

SPE：PSA

提取：

称取样品1.0g于玻璃离心管，加入2mL提取剂10mL提取剂2，涡旋2min，4000rpm离心2min，取下层液，向残留溶剂中加入10mL提取剂2，合并两次提取液，40℃氮吹近干，加入2mL正己烷，振荡混匀、待净化。

提取剂1：乙腈饱和的正己烷

提取剂2：正己烷饱和的乙腈

净化：

活化：5mL丙酮、5mL正己烷

上样：净化液，流速1mLmin

洗脱：5mL正己烷、5mL 4%丙酮-正己烷，收集上样-洗脱，40摄氏度吹到0.5mL，缓慢挥干，乙腈定容1mL，HPLC或者GCMS检测。

6、基质：薯片

SPE：PSA

提取：

0.2g样品，加入5mL乙腈，涡旋混合2min，6000 RPM5min，收集上清液，待净化。

净化：

活化：5mL丙酮、5mL正己烷

上样：净化液，流速1mLmin

洗脱：5mL正己烷、5mL 4%丙酮-正己烷，收集上样-洗脱，40摄氏度吹到0.5mL，缓慢挥干，乙腈定容1mL，HPLC或者GCMS检测。

7.基质：方便面

SPE：PSA

提取：

称取样品0.5g于玻璃离心管中，加入10mL正己烷，涡旋2min，4000RPM快速离心3min，吸取上清液，残渣10mL正己烷重新提取，合并两次上清液，40℃吹干，2mL正己烷复溶，待净化。

净化：

活化：5mL丙酮、5mL正己烷

上样：净化液，流速1mLmin

洗脱：5mL正己烷、5mL 4%丙酮-正己烷，收集上样-洗脱，40摄氏度吹到0.5mL，缓慢挥干，乙腈定容1mL，HPLC或者GCMS检测。

8、基质：酱油，醋

SPE：PSA

提取：

酱油：称取2mL样品于玻璃具塞管中，加入2mL甲醇、10mL正己烷/甲基叔丁基醚（1：1），充分涡旋2mL，4000RMP离心2min，取上清液，再10mL正己烷/甲基叔丁基醚（1：1）重新提取一次，合并两次提取液，40℃吹干，2mL正己烷复溶，待净化。

醋：称取5mL样品于玻璃具塞管中，加入5mL正己烷、涡旋2min，4000RMP离心2min，取上清液，再用5mL正己烷重复提取一次，合并两次的上清液，40℃吹干，2mL正己烷复溶，待净化。

净化：

活化：5mL丙酮、5mL正己烷

上样：净化液，流速1mLmin

洗脱：5mL正己烷、5mL 4%丙酮-正己烷，收集上样-洗脱，40摄氏度吹到0.5mL，缓慢挥干，乙腈定容1mL，HPLC或者GCMS检测。

六、谱图+回收率

食用油中200ppb邻苯添加GCMS谱图

食用油的加标回收率

七、总结

邻苯的lgKow在1-10之间，因此属于非极性到中等极性，大部分邻苯的水溶解性较差，主要溶解在正己烷、醇、醚、酮、苯、矿物油中，对于水环境的邻苯，可以使用非极性保留，如：C8、C18、聚合物非极性吸附填料（HLB）等，反相吸附保留，甲醇、乙醚、乙酸乙酯等组合试剂作为洗脱剂，对于含油、色素、蛋白等食品中的邻苯，考虑使用硅胶或者PSA等极性柱子，杂质净化的模式，一般采用非极性的正己烷提取，上样，弱极性/非极性溶剂淋洗，收集上样-淋洗-洗脱液，N2吹干，复容解上机检测，另外实验中注意SPE使用玻璃材质，耗材尽量避免使用塑料材质的聚丙烯/聚乙烯等可能添加邻苯的耗材，至少做好空白验证。

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