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【Nature】赛多利斯这对CP助力CAR-T王炸诞生
在血液癌症中疗效显著。由于缺乏肿瘤特异性的膜抗原，CAR-T疗法在实体瘤中的应用受到了很大的限制。绝大部分的肿瘤相关抗原属于胞内蛋白，这些靶点蛋白的降解片段可以通过主要组织相容性复合体 (MHC)呈递到肿瘤细胞表面，可被免疫系统识别，从而杀伤肿瘤细胞。
美国费城儿童医院的研究人员非常巧妙地选择了很难通过蛋白突变找到治疗靶点的神经母细胞瘤作为研究对象，筛选出了特异存在于肿瘤细胞表面的多肽，以此肽为靶点嵌合抗原受体开发CAR-T治疗，并起了个新名字：PC-CAR（“peptide-centric” chimeric antigen receptors），该研究发表在最近的Nature期刊中。赛多利斯Octet®分子互作分析仪和Incucyte®实时活细胞分析仪这对CP又立功了。
案例分享
PC-CAR示意图，当中红色为抗原呈递多肽
首先，将MHC分子结合的多肽通过类似pull-down的方法富集，然后用质谱的方法进行鉴定，然后通过大型基因组数据进行分析对比和亲和力预测，研究人员确定了一种未突变的神经母细胞瘤肽，它源自PHOX2B，是一种神经母细胞瘤依赖性基因和转录调节因子。并顺手拿到了其与MHC分子的复合物。
PHOX2B与MHC分子的复合物结构
以PHOX2B为靶点，使用噬菌体展示的方法筛选出了特异性针对的ScFv作为CAR，名字为10LH，用【生物层干涉法（BLI）】测得其与PHOX2B亲和力强，为13nM。
使用BLItz（Octet N1）固化10LH，与多肽进行结合解离。kd=76×10−4/s，KD=13 nM。而另外一种ScFv 302LH的解离速率较快，亲和力较低。
接下来就是以免疫细胞杀伤为主的功能实验，而在这篇文章中这个实验的主力就是【Incucyte®实时活细胞分析仪】，可以实时分析细胞的增殖和杀伤情况。
在杀伤实验中，加入Caspase 3/7 红色荧光染料，靶点细胞（肿瘤细胞）带GFP绿色荧光，用Incucyte®实时计算红色荧光面积和绿色荧光面积。红色荧光面积升高快，绿色荧光下降快，则代表杀伤效果越大。
Incucyte®实时活细胞成像：a左图为PC-CAR对SKNAS胶质瘤细胞的杀伤作用明显，a右图为PC-CAR对其他肿瘤细胞的杀伤则不明显。b图从靶细胞增殖水平来观察，发现PC-CAR对SKNAS等胶质瘤细胞的杀伤作用明显。
文章中还放出了Incucyte®软件制作的关于不同时间杀伤效果的视频，让我们看看更震撼的视频效果吧！
10LH对不同肿瘤细胞移植的小鼠肿瘤均有抑制作用，而302LH对NBSD细胞系的抑制效果较差。
Summary
总结
这篇文章意义重大：
1 | PC-CARs可用于通过使用合成的以肽为中心的受体诱导免疫原性，靶向必需的未突变癌蛋白； |
2 | 由于不受 TCRs上CDR1 和 CDR2 与MHC的相互作用限制，PC-CAR 可以靶向由多个 HLA 等位基因，开辟了大幅增加每种多肽的临床适用范围 |
3 | 同样因为不依赖CDR1/CDR2的作用，PC-CAR可以增加与抗原呈递多肽互作面积，增加亲和力。 |
所以PC-CAR可能才是CAR-T治疗实体瘤的王炸，当然有赛多利斯的Octet®分子互作分析系统和Incucyte®实时活细胞成像这对CP的助力下！
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Incucyte®实时活细胞成像分析为免疫学实验提供了高效便捷的工具。2020年，Science副刊《Science Immunology》还曾专门发布独家文章，对Incucyte®的相关应用进行聚焦和分析。
《活细胞成像与分析的非凡优势》
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-参考文献-
Cross-HLA targeting of intracellular oncoproteins withpeptide-centric CARs.Nature,2021
