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单细胞测序样本制备系列——心脏心血管
单细胞测序实验的第一步是样本制备，也就是通过酶消化法（如胰酶、蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶等）或机械消化、细胞分选或其他细胞分离技术从整个样本中制备生成活的单细胞悬液。工欲善其事必先利其器，样本制备在单细胞测序中是非常重要的环节，细胞悬液背景内存在大量碎片或死细胞时，会造成背景信号较高，致使可有效利用的数据减少，稀有细胞群检出率低。
心脏是哺乳动物循环系统的核心。作为机体重要的功能性器官，心脏的细胞组成复杂，主要包括心肌组织、神经组织、蒲肯野氏纤维、结缔组织、上皮组织等。
结缔组织及细胞间较为致密的结构极大增加了心脏组织的解离难度，操作条件和酶的选择等需要根据经验进行一定的调整。吉凯基因根据已有的参考文献和大量的实验经验积累，总结出了针对心脏组织的单细胞测序样本制备方案，同时，对于心脏组织中占比很低的目的细胞，还可以结合个性化的分选方案，特异性分选出目的细胞群体。下面就让我们跟着小编一起来涨姿势吧！
一、小鼠心脏单细胞悬液制备
实验目的：制备小鼠心脏单细胞悬液并分选，用于单细胞测序。
实验准备：2 mg/ml Collagenase IV；0.5 mg/ml Dispase II ；HBSS；
【其它实验准备】：超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，预冷清洗液。
实验步骤：
1. 分离心脏，去除心房和瓣膜，剪成 1mm3 大小；
2. 使用3ml酶37℃消化45min，每15min用枪头吹吸一下；
3. 使用 40μm 滤网过滤酶解液去除组织块，再添加清洗液至 15ml，300g，5min 收集细胞；
4. 使用 1ml 清洗液重悬细胞沉淀；
5. 将细胞沉淀小心加在 30% percoll 上层，400g，20min 离心去除杂质；
6. 收集底层沉淀，另使用 10ml 清洗液重悬沉淀，300g，5min 离心清洗细胞 2 次，镜检；
7. 分选方案：CD45-CD31+LVYE1+，使用流式+磁珠分选相结合的方式分选出目的细胞群体，镜检。
实验结果：
1. 分选前
2. 分选后
二、人心脏单细胞悬液制备
实验目的：制备人心脏组织单细胞悬液，用于单细胞测序。
实验准备:2mg/ml Collagenase IV;0.5mg/ml Dispase II；PBS；
【其它实验准备】：超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，预冷清洗液。
实验步骤：
1. 按上述酶消化液配方配制酶消化液，约20ml；
2. 使用清洗液清洗组织3次, 弃去清洗液后，加入酶液，用剪刀将组织剪碎；
3. 将剪碎的组织全部收集，共10ml消化液，用封口膜将离心管封好，放入摇床中37°C消化；
4. 第60min,加入清洗液终止消化，将消化后液体通过40um至50ml离心管中完全收集，300g离心5min, 弃上清，加入红细胞裂解液裂解红细胞3min;
5. 裂解结束后，加入清洗液终止裂红，300g离心5min；弃上清，1ml体积重悬;采用30%percoll离心去除杂质；
6. Percoll结束后，弃上清，1ml清洗液重悬，取20ul台盼蓝镜检；
7. 加入清洗液清洗，300g离心5min。弃上清，1ml重悬，取20ul台盼蓝镜检，AO/PI染色记录细胞活率。
实验结果：
