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糖化血红蛋白定量检测新方法——融智生物DSMSA直接定量法

融智生物

2022.2.14

临床意义

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是继心脑血管疾病、恶性肿瘤后的第三大威胁人类健康的慢性非传染性疾病。中国目前约有1.2亿糖尿病患者，约占全球总患者数的四分之一，已成为患者人数最多的国家，而且数量仍在持续快速增长中，给患者个体和国家带来了沉重的经济负担。糖尿病引起的严重并发症是主要致死原因，56%的糖尿病人未得到及时诊治和干预，糖尿病防治任重道远。

糖尿病引起的相关并发症

糖尿病诊断的金标准是血糖检测，但是血糖波动大，检测影响因素多，结果不准确。糖化血红蛋白HbA1c结构稳定，是由血红蛋白HbA1(ααßß)β链N末端缬氨酸共价结合葡萄糖形成，与血糖值正相关，且不受到短暂血糖变化的影响，可准确地反映历史3个月血糖整体水平。

2011年，世界卫生组织（WHO）将HbA1c明确为糖尿病检测的“金标准”。《中国血糖监测临床应用指南（2015年）》指出我国HbA1c检测已经实现标准化，HbA1c是评估长期血糖控制的金标准，也是临床决定是否需要调整治疗方案的重要依据。《中国2型糖尿病防治指南（2020年）》正式确立以HbA1c≥6.5%作为临床诊断切点，辅助糖尿病诊断。目前，HbA1c作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效考核的有效检测指标，在临床中得到了广泛的使用。

《中国2型糖尿病防治指南（2020年）》

糖尿病诊断标准

注：空腹状态指至少8小时有进食热量；随机血糖指不考虑上次用餐时间，一天中任意时间的血糖不能用来诊断空腹血糖受损或糖耐量异常

HbA1c定量检测适用对象

糖尿病患者临床辅助诊断，如出现乏力、头晕、肢体麻木的患者

糖尿病患者治疗监测，HbA1c定量检测是判断治疗是否达标的“金标准”

糖尿病高危人群筛查，加强对糖尿病慢性并发症的认识和预防

孕期高血糖检测和控制

医院急诊术前患者检测

HbA1c定量检测相关科室

公司福利

内分泌科

糖尿病并发症的相关科室，如眼科(视物模糊)、神经内科(肢端感觉异常)等

DSMSA^TM直接定量法优势

MALDI-TOF如今已经诞生30多年，通过“软电离”技术与飞行时间质谱的结合，为生命科学领域提供了全新的分析方法。融智生物推出的拥有自主知识产权的新一代高通量、高灵敏度飞行时间质谱QuanPRO，更是引领MALDI-TOF技术进入“宽谱+定量”的新时代。

融智生物基于QuanPRO蛋白定量质谱开发的HbA1cDSMSATM直接定量检测方法，直接对样品进行稀释后再用MALDI-TOF质谱技术进行检测，低成本、高通量、高分辨率、高灵敏度、完美解决临床检测需求。

7种常见血红蛋白变异体对6种检测系统的影响

(对比sebia毛细管电泳法)

注：不同检测系统受变异血红蛋白影响差异巨大，从左至右的平台分别为：伯乐HPLC、东曹HPLC、爱科来HPLC、罗氏免疫比浊法、普莱默斯亲和层析HPLC

参考文献：AnpingXu,Yajun Wang. et al. Evaluation of MALDI-TOF MS for the measurementof glycated hemoglobin. Clinica Chimica Acta. 2019, 498(154–160).

血红蛋白β链糖化峰质谱图叠加图

注：三种不同糖化率样本：6%，9%及14%，每种样本重复24次点样测试(CV分别为1.39%、0.71%及0.62%，R²=0.9992)，共计72(3x 24)次测试质谱图叠加图

DSMSA^TM直接定量法HbA1c定量检测技术特点：

精密度高：CV<5%，获得国际权威机构NGSP认证，长期一致性高，对药效的监测更准确

高特异性，抗干扰能力强：有效排除变异血红蛋白的干扰，定量结果准确可靠，

检测成本低

样品处理快捷方便：结合融智生物配套全自动点样仪，无需复杂操作即可上机检测

样本检测时间短，通量高：30秒内即可完成一个样品检测

可以检测蛋白变异体：为新型疾病的诊断和鉴定提供了更多可能性

全球首个获得国际权威机构NGSP认证的

飞行时间质谱方法

注：NGSP，美国国家糖化血红蛋白标准化计划，NationalGlycohemoglobin Standardization Program

发现新的变异血红蛋白Hb-辽宁

注：上图为正常人质谱图，下图为先证者Hb-辽宁质谱图。

参考文献：AnpingXu, Yajun Wang, et al. Detection of a novel hemoglobin variant HbLiaoning by matrix assisted laser desorption/ionization-time offlight mass spectrometry. Clin. Chem. Lab. Med. 2019,57(12):e328-e330.

技术方案

实验流程如下：

QuanPRO蛋白定量质谱系统

QuanPRO蛋白定量质谱系统，是融智生物自主研发的新一代高分辨率宽谱定量飞行时间质谱（MALDI-TOF MS），具有宽质量范围(10-1,000,000Da)检测能力，在高、低质量区均能达到高分辨率。同时，精密度满足临床定量分析需求(CV<5%)，可同时检测蛋白修饰和蛋白变异体，具有高分辨率、高灵敏度、高精密度、高通量、低成本的优势。

QuanPRO蛋白定量质谱系统的技术原理：用一定强度的激光照射样本与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量而汽化，并迅速降解,使样本分解吸附，基质和样本之间发生电荷转移从而使样本分子发生电离；带有电荷的样本分子在电场作用下加速飞过飞行管道，因为离子的质荷比与离子的飞行时间呈正比，所以不同质量的离子因达到检测器的飞行时间不同而被检测，以离子峰为纵坐标、离子质荷比为横坐标形成特征性的质量图谱，进行实现对不同质荷比的物质进行区分和鉴定。