分享至
精彩回放及答疑 | 聚焦 CGT 黄金赛道，安捷伦细胞与基因治疗系列网络研讨会
近年来，细胞与基因治疗（CGT，Cell and Gene Therapy）已成为最引人注目的医学领域之一。目前，受益于技术、政策、资本等方面的利好，与细胞与基因治疗（CGT）相关的研究开发正在如火如荼地进行。从临床管线来看，多数细胞与基因治疗（CGT）项目尚处于临床早期，随着临床管线的推进与细胞与基因治疗（CGT）相关的产品可能会呈现加速上市的姿态。
4 月 27 日，由安捷伦主办、医麦客承办的“安捷伦细胞与基因治疗系列网络研讨会—第一期 免疫治疗的科研之路” 受到了业内专家学者的广泛关注，直播期间观众提问踊跃。为了让更多的观众从精彩问答中受益，我们特别请安捷伦诊断与基因组学事业部、细胞分析事业部的三位分享嘉宾就当天评论区问题进行了详细解答。您也可以点击文末图片，收看整场直播回放。
Q
1.RTCA 除了可以用于肿瘤免疫杀伤，还有哪些应用？比如疫苗或者药物研究是否可以？
A
RTCA 还可以用于药物开发、细胞迁移与浸润、病毒与疫苗、细胞间相互作用、活细胞成像、心肌毒性及环境科学的研究中。RTCA 不仅可以用于疫苗或药物研究，还可提高实验效率，数据更为客观准确。
Q
2.RTCA eSight 有几个荧光通道？这台设备只能拍照吗？
A
RTCA eSight 有三个荧光检测通道，分别为红、蓝、绿三种荧光；RTCA eSight 不仅可以实时成像，还可以进行实时无标记电阻抗检测，在同一次实验中，得到更多的数据，提升实验效率，加速研究进展。
Q
3.安捷伦流式的最高配置可检测多少个荧光？自动上样器可兼容哪些孔板？
A
安捷伦流式目前最高可配置 5 激光 30 个荧光检测通道；自动上样器兼容 24/48/96(Flat/U/V bottom)/384 孔板。
Q
1.安捷伦可以合成基于 prime editing 原理的 gRNA 吗？
A
可以合成基于 prime editing 原理的 pegRNA，安捷伦常规可以合成 120nt，最长可达 164nt。
Q
2.如果我的系统里使用的不是 Cas9，是否可以自定义 tracrRNA 序列？
A
可以。整个 sgRNA 的序列都可以自定义，根据语法规定输入即可，包括碱基及修饰。
Q
3.gRNA 互补区如果不是 100%匹配会切么？
A
这种情况也有可能会发生，即脱靶。在设计 sgRNA 序列的时候，尽量避免有高度同源序列的区域，另外使用高质量的 gRNA 可以帮助降低脱靶率。特定的 gRNA 修饰也可以帮助降低脱靶率。
Q
4. 编辑效率一般能达到多少？
A
编辑效率的影响因素很多，目标位置、编辑类型、细胞类型、转染条件、Cas 蛋白等等等等。从我们发表的数据可以看到在该实验条件下的编辑效率，可供参考，knock out 编辑效率可达到 80-90%，hrGFP 插入的编辑效率可达到 30-40%。
Q
5. 在 gRNA 设计页面上如果提交的 gRNA 序列有输入错误怎么办，有提示吗？
A
设计页面会提示输入错误，例如 B, X, 等这类非碱基或表达修饰的字母。也可以识别序列过长或过短（允许的范围为 30-200nt）。如果序列本身错误则不能识别。用户可以在 My design 里随时查看所提交的序列，复核检查。
Q
1.每孔细胞量是怎么确定的？
A
建议设置细胞密度梯度进行细胞密度优化，根据推荐的基础 OCR 值范围选择合适的细胞接种密度，细胞汇合度一般为 50-90%。
Q
2. 细胞培养时间的长短是否影响测试结果，能否详细介绍一下 seahorse 对细胞培养的要求。
A
对于贴壁细胞，根据实验设计需求，在上机检测前一天或数天前以合适的细胞密度接种到 Seahorse XF 细胞培养板中。悬浮细胞则在上机检测的当天将细胞以合适细胞量接种到 Seahorse XF 细胞培养板中。
Q
3. 悬浮细胞如何测试和进行数据归一化。
A
在检测当天，将悬浮细胞接种到经粘附剂包板的 Seahorse XF 细胞培养板中，离心使细胞贴壁后进行测量。
如果每孔或每组细胞数目不同，需进行数据归一化。以 T 细胞为例，建议在细胞种板前准确计数，使用总细胞数计算细胞接种量，用活细胞数进行数据归一化。
关于安捷伦
安捷伦科技有限公司（纽约证交所：A）是生命科学、诊断和应用化学市场领域的全球领导者，致力于为提高生活质量提供敏锐洞察和创新经验。安捷伦的仪器、软件、服务、解决方案和专家能够为客户最具挑战性的难题提供更可靠的答案。2021财年，安捷伦营业收入为63.2亿美元，全球员工数约为17,000人。
长按识别二维码，关注安捷伦细胞分析
