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(2)测定DNA损伤程度和细胞杀灭效应之间的关系 最近,用“彗星”法分析人体肿瘤多细胞球体和实验动物肿瘤的结果显示,初始DNA损伤的量化测定可能成为评价细胞杀灭效应的指标。结果亦显示肿瘤细胞具有修复DNA损伤的能力,而细胞修复损伤的能力被认为是判断同样打击条件下,不同细胞存活程度的另一重要依据。...
如果在碱性电泳液(pH>13)中,先是DNA双链解螺旋且碱变性为单链,单链断裂的碎片分子量小可进入凝胶中,电泳时断链或碎片离开核DNA向阳性迁移,形成拖尾。细胞DNA受损愈重,产生的断链或碱易变性断片就愈多,其断链或断片也就愈小,在电场作用下迁移的DNA量多,迁移的距离长,表现为尾长增加和尾部荧光强度增强,因此,通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度可定量地测定单个细胞DNA损伤的程度。...
可以看出,上排DNA无断裂损伤的样品,每个细胞呈现圆形,而有DNA损伤的样品则有明显的彗星状拖尾。 得到了清晰的图像之后,如果需要测定DNA损伤的情况,就必须要进行精确的图像分析。通常来说,DNA损伤用于评估基因毒性需要测定两个指标:% DNA in Comet Tail(慧尾DNA%) 及 Tail Moment(尾距)。...
分析tail moment可同时得知最小的发生了迁移的DNA(反映在彗星尾的长度)和被释放或断裂的DNA片段(通过尾部DNA的荧光强度反映出来)。彗星鉴定可用于检测凋亡细胞寡核小体片段,在中性和碱性彗星鉴定中其终点现象都很明显。在标准的碱性彗星鉴定中,凋亡细胞DNA片段迁移的长度是没受损伤细胞的几倍。彗星鉴定检测DNA断链极为敏感,有人认为比流式细胞仪方法还能更早地检测出凋亡细胞。...
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