在蛋白酶 K 消化后使用固相萃取进行样品制备。在体外培养系统中的小鼠肝脏中观察到由 3’种核酸外切酶引起的 eluforsen 链缩短的代谢物,以及在来自小鼠和猴子体内研究的肝脏和肺样品中由 3’种核酸外切酶或 5’种核酸外切酶引起的链缩短代谢物。本研究为在体外和体内研究中进一步表征 2’-核糖修饰的硫代磷酸酯寡核苷酸的代谢物提供了方法,以支持寡核苷酸治疗剂的开发。...
由此可见,对不同类型的组织DNA提取,蛋白酶K的孵育时间可作适当调整,以求大量地获取大分子DNA。此外,对于Dubeau等提出的DNA提取过程中分次消化步骤的必要性,也有人提出异议。因为低、中分子量的核酸存在对限制性内切酶的消化和杂交不起作用。...
②多次提取消化法 多次提取消化法有以下三种: 热消化多次提取——将剪碎的细胞块加入0.25%胰蛋白酶37℃水浴中消化15~20分钟,然后经洗涤后用营养液分散制成细胞悬液,按合适的浓度分瓶培养,然后将留下的未彻底消化的组织按上述方法操作,再消化提取细胞。 冷消化多次提取——方法同上,只是消化温度为4℃。 ...
由此可见,对不同类型的组织DNA提取,蛋白酶K的孵育时间可作适当调整,以求大量地获取大分子DNA。此外,对于Dubeau等提出的DNA提取过程中分次消化步骤的必要性,也有人提出异议。因为低、中分子量的核酸存在对限制性内切酶的消化和杂交不起作用。...
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