纯化的DNA在每个试剂盒的洗脱缓冲液100μL中洗脱,并使用Promega QuantiFluor dsDNA系统进行定量。通过使用纯化DNA的10X,100X和1000X稀释的16S细菌特异性引物进行实时PCR来分析来自两个试剂盒的纯化DNA的质量。...
氨氧化反应是硝化作用的第一步,也是全球氮循环中由微生物活动形成硝化盐的重要进程。Leininger[11]检测了3个气候区域12块原始和农业用地的土壤里编码氨单加氧酶(amoA)的一个亚基的基因丰度。采用反向转录定量PCR研究及无需克隆的焦磷酸测序技术对互补DNA测序,证实古细菌的氨氧化活性要远高于细菌,证实Crenarchaeota可能是土壤生态系统中最富有氨氧化活性的微生物。...
氨氧化反应是硝化作用的第一步,也是全球氮循环中由微生物活动形成硝化盐的重要进程。Leininger[11]检测了3个气候区域12块原始和农业用地的土壤里编码氨单加氧酶(amoA)的一个亚基的基因丰度。采用反向转录定量PCR研究及无需克隆的焦磷酸测序技术对互补DNA测序,证实古细菌的氨氧化活性要远高于细菌,证实Crenarchaeota可能是土壤生态系统中最富有氨氧化活性的微生物。 ...
由于土壤对裸露DNA片段以及细菌本身的吸附性不一致,所以一般将该片段连接在载体并克隆到大肠杆菌的感受态细胞中后,再添加到样品中,而不是直接将裸露的DNA片段添加到样品中。最后按照比例定量添加到土壤样品中,混合样本按照常规样品进行DNA提取、片段扩增及测序,根据测序结果中内参的序列相对丰度及实际添加量来对其他物种进行定量。...
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