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⑨ 第 5 天,用 2X YT 培养液收集培养板上长出的克隆,加入 15% 甘油,制备出 R-1 噬菌体库,-80℃ 保存。此噬菌体展示库又可以用辅助噬菌体进行感染,进行下一轮的蛋白展示、RNA 结合、感染宿主菌、筛选结果分析等工作。7....
⑨ 第 5 天,用 2X YT 培养液收集培养板上长出的克隆,加入 15% 甘油,制备出 R-1 噬菌体库,-80℃ 保存。此噬菌体展示库又可以用辅助噬菌体进行感染,进行下一轮的蛋白展示、RNA 结合、感染宿主菌、筛选结果分析等工作。7. 结果分析每次通过与 RNA 的结合对噬菌体进行筛选之后再对噬菌体滴度进行检测不仅有助于了解每次实验操作中所筛选的噬菌体的数量,还可以了解到筛选的进行程度。...
附加试剂本方案步骤 4 需要的试剂列于第 2 章方案 1。本方案步骤 7 需要的试剂列于第 2 章方案 23。载体和菌株λ噬菌体臂如果准备要制作大量文库,自行制备噬菌体臂(通过琼脂糖凝胶电泳或蔗糖密度梯度离心,见第 2 章方案 16) 要比购买省钱得多。...
再重复 10 次上述的加入和收集步骤,总共收集 12 份 200 μl 流出液。6. 使用闪烁计数仪测量契仑科夫数以确定含有最高特异活性的流出液,并计算 cpm/μl。典型的情况是可见到两个强信号峰:第一个峰在第 5~9 份流出液之间,由标记蛋白质产生。遗弃第二个峰,它由未结合的 ATP 产生的。7. 可选:用 SDS-PAGE 分析小量(1~2 μl)的 32P 标记的蛋白质探针并作放射自显影。...
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