为此,中国测试技术研究院联合相关单位,等同采用国际标准,牵头制定了GB/T 42076.1-2022《生物技术 细胞计数 第1部分:细胞计数方法通则》和GB/T 42077-2022《生物技术 核酸靶序列定量方法的性能评价要求 qPCR法和dPCR法》两项国家标准,已于近期获得发布实施,为我国细胞计数和核酸靶序列定量测定满足国际标准要求提供了标准依据,并为生命健康产业相关技术应用奠定了技术基础。...
qPCR只能实现相对定量(比如样品A的靶序列是样品B的两倍),除非用标准品生成一个标准曲线。而数字PCR本身就是绝对定量的,不需要做标准曲线。另一方面,qPCR技术更为成熟名头也更响,市面上有大量的商业化产品可供选择。dPCR目前还是个小鲜肉,应用没有qPCR那么广泛,价格也更昂贵一些。与dPCR相比,qPCR更适合高通量分析,而且动态范围很宽。 dPCR一般来说更为精确。...
dPCR一般包括两部分内容,即PCR扩增和荧光定量分析。 在PCR 扩增阶段,与传统技术不同,dPCR一般需要将样品稀释到单分子水平,并平均分配到几万个反应腔室里反应。这样子相当于变相的对靶基因进行富集。与此同时,由于对原样品的大幅度的稀释,使得PCR抑制剂浓度显著降低,这样dPCR对初始PCR反应物里抑制剂的要求显著低于qPCR。...
痕量核酸检测的具体分类 dPCR尤其适合:对灵敏度要求非常高的核酸痕量分析研究;基质复杂样品中的核酸准确定量(如组织、体液、排泄物等样品)。 图10. 痕量核酸检测相关方法比较 6.1.1 癌症标志物稀有突变检测 在一份给定的样本中,相比于野生型DNA,癌症相关的突变序列比例较低,经常无法检测。而凭借其超高灵敏度,dPCR系统可以很容易地定量分析低至0.001%-0.0001%的突变频率。...
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