GB/T 42077-2022
生物技术 核酸靶序列定量方法的性能评价要求 qPCR法和dPCR法
Biotechnology—Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences—qPCR and dPCR
GBT42077-2022, GB42077-2022
- 标准号
- GB/T 42077-2022
- 别名
- GBT42077-2022, GB42077-2022
- 发布
- 2022年
- 采用标准
- ISO 20395:2019 IDT
- 发布单位
- 国家质检总局
- 当前最新
- GB/T 42077-2022
- 引用标准
- ISO/IEC GUIDE 99
- 适用范围
- 本文件规定了核酸靶序列定量方法的性能评估和质量保证的通用要求。 本文件适用于数字PCR(dPCR)或实时定量PCR(qPCR)扩增技术对DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)靶序列的定量测定。适用的靶序列核酸分子,包括双链DNA(dsDNA),如基因组DNA(s sDNA),互补DNA(cDNA),单链RNA(s sRNA)包括核糖体gDNA)和质粒DNA;单链DNA(RNA(rRNA)、信使RNA(mRNA);双链RNA,包括长链和短链非编码RNA[微小RNA(miRNA)和小干扰RNA(s iRNA)等]。 本文件适用于生物来源的核酸(如病毒、原核细胞和真核细胞)、无细胞生物液体样本(如血浆或细胞基质);体外非生物来源的核酸[如寡核苷酸、合成的基因片段和体外转录(IVT)的RNA]中提取的核酸。 本文件不适用于过短的DNA寡核苷酸(<50 碱基)的定量。 本文件包含: ———分析设计,包括定量策略(dPCR分子计数法、dPCR比qPCR标准曲线法、qPCR相对定量法、值定量法)和使用控制; ———总核酸质量浓度定量和核酸样本质量控制,包括核酸质量的评估(纯度和完整性); ———PCR试验设计、优化,生物信息学和体外特异性测试; ———数据质量控制和分析,包括验收标准、阈值设置以及归一化方法; ———根据qPCR/dPCR具体要求的方法验证(精密度、线性、定量限、检出限、正确度和稳健性); ———计量溯源性建立和测量不确定度评估的方法。 本文件不对生物材料的抽样或生物样本的处理过程(如采集、保存、运输、储存、处理和核酸提取)提出要求或验收标准。也不对特殊应用(如可能出现特殊基质问题的食品或者临床应用领域)提出要求和验收标准。
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PCR、qPCR、dPCR你需要知道的事儿
qPCR只能实现相对定量（比如样品A的靶序列是样品B的两倍），除非用标准品生成一个标准曲线。而数字PCR本身就是绝对定量的，不需要做标准曲线。另一方面，qPCR技术更为成熟名头也更响，市面上有大量的商业化产品可供选择。dPCR目前还是个小鲜肉，应用没有qPCR那么广泛，价格也更昂贵一些。与dPCR相比，qPCR更适合高通量分析，而且动态范围很宽。 dPCR一般来说更为精确。...