SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Cultures)

2002年，丹麦Mann实验室的Ong等对AACT技术作了进一步改进，建立了SILAC技术并首次应用于定量蛋白质组研究，为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的方案。

原理：SILAC的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定。

 

1、SILAC是体内标记技术，稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同，对细胞无毒性，因而它所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上几乎没有差异，标记效率可高达100％

2、与化学标记相比，SILAC方法蛋白需要量明显减少

3、活体标记，更接近样品真实状态

4、只适用于活体培养的细胞对于生物医学研究中常用的组织样品，体液样品等无法分析

5、对于动物模型的标记成本太大，无法实现

仪器：Finnigan LTQ

我们发表的论文：

Liu-Ya Tang, Ning Deng，et,al.Quantitative Phosphoproteome Profiling of Wnt3a Mediated Signaling Network: Indicating the Involvement of Ribonucleoside-diphosphate Reductase M2 Subunit Phosphorylation at Residue Serine-20 in Canonical Wnt Signal Transduction  MCP Papers in Press. Published on August 12, 2007 as Manuscript. M700120-MCP200