艾蒿花粉主要变应原的分离、纯化与鉴定

【摘要】　目的　对我国蒿属花粉中常见、重要的变应原艾蒿花粉进行分离、鉴定与纯化。方法采用不同的提取液得到艾蒿花粉粗浸液,经饱和(NH4 ) 2 SO4 分级沉淀后用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量( Mr ) ;采用Western blot 鉴定其主要及次要变应原;通过DEAE2Cellulose DE232 离子交换层析(ion exchange chromatography , IEC) 和Sephadex G275 凝胶层析(gel chromatography) 对艾蒿花粉变应原进行纯化。结果　分离后得到20 多种
蛋白质组分,其中Mr 为58 ×103 、38 ×103 、25 ×103 、20 ×103 、16 ×103 等5 个条带蛋白含量最丰富;分离到的蛋白质组分中有9 种蛋白能与确诊的蒿属花粉过敏患者血清中蒿属花粉特异性IgE 结合,其中Mr 为62 ×103 、43 ×103 、38 ×103 的蛋白条带的结合率最高;经纯化后仅得到Mr 为62 ×103 的主要变应原。结论　艾蒿花粉的主要变应原Mr 分别为62 ×103 、43 ×103 和38 ×103 ,层析技术可以对Mr 为62 ×103 的主要变应原成分进行纯化。