人组织金属蛋白酶抑制因子23的分离纯化及其生物学性质

[摘要] 目的: 从人胎盘中分离、纯化组织金属蛋白酶抑制因子23 ( TIMP23) , 并对其对基质金属蛋白酶21 (MMP21)的抑制作用进行评价。方法: 利用含4 mol/L 尿素的Tris2HCl缓冲液(pH 8. 0) , 从除去多数水溶性蛋白的胎盘匀浆液中提取难溶性蛋白。经CM52阳离子交换树脂和Sephacryl S2200凝胶过滤两步柱层析纯化后, 用SDS2PAGE鉴定TIMP23 的纯度; 用EIA和Western blot检测TIMP23的含量; 用免疫荧光测定法检测TIMP23对MMP21的抑制活性。结果: 人胎盘来源的TIMP23由相对分子质量(M r )为24 000的非糖化蛋白和M r 为27 000的糖化蛋白组成。非糖基化的TIMP23对MMP21的IC50为1. 1 ×10 - 10 mol/L, 糖基化的TIMP23为1. 2 ×10 - 10mol/L, 显著高于重组的TIMP23 ( IC50为8 ×10 - 8 ) 。结论: 人胎盘来源的TIMP23由M r 为24 000的非糖基化蛋白和M r 为27 000的糖基化蛋白两部分组成, 二者对MMP21均具有明显的抑制作用。