人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定

【摘要】　目的　对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法　用含Fc 片段抗2HBsAg Fab 抗体基因的载体pAC2HBs2Fc ,与杆状病毒线性DNA 共转染昆虫细胞sf9 ,产生重组抗2HBsAg 的全抗体。以不同浓度的HBsAg 包被酶标板孔,用间接ELISA 法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS2PAGE、Western blot 和竞争性ELISA 分析。结果　上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg 呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97. 1 %。经SDS2PAGE 和Western blot 分析可见, IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27 000 和55 000 ,为人源IgG抗体。CHO 表达的HBsAg 和血源性HBsAg 能竞争性抑制该重组IgG抗体与E. coli 表达的HBsAg 反应,其抑制率分别为55. 9 %和81. 9 %。结论　人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。