胰腺癌裸鼠皮下瘤建模方法及单克隆抗体治疗

被称为“癌中之王”的胰腺癌，是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤，如何预防、发现、治疗胰腺癌也成为大家关心的话题。建立裸鼠肿瘤模型，可为胰腺癌生物学行为的基础研究及治疗提供实验平台。近几年来随着分子生物学的发展，以单克隆抗体为代表的免疫治疗在胰腺癌的治疗中也取得了较大进展，为胰腺癌的治疗提供了新的方法和手段。

医学上通常用裸鼠肿瘤模型来研究肿瘤及其治疗，可以用该模型来测试可能的靶向药物，在肿瘤复发之前找到真正有效的靶向药物。美迪西药理学服务可以为客户提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验。裸鼠皮下瘤实验，即在裸鼠皮下注入肿瘤细胞，观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果，美迪西提供裸鼠皮下瘤实验服务。

1、人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的研究

用细胞注射法可以建立裸鼠皮下移植瘤模型，取人胰腺癌细胞株BXPC-3常规传代培养至一定数量，取体外培养的细胞处于对数生长密集期时，用2.5g/L胰酶消化细胞，制成细胞悬液。用细胞计数板进行细胞计数，并用台盼蓝染色检测细胞活力>95%，调整浓度至1*10^7。安尔碘消毒每只裸鼠右背部及股外侧皮肤，将准备好的胰腺癌细胞悬液用规格为1mL的注射器抽取0.2mL（1*10^7个活细胞/mL）在右背部皮肤皮下注射。

2、胰腺癌裸鼠皮下瘤模型两种建立方式的比较

对胰腺癌裸鼠皮下瘤模型的两种建立方式进行比较，方法可通过瘤块皮下移植法和直接皮下细胞注射法建立裸鼠胰腺癌皮下瘤模型，观察二者的接种阳性率、肿块生长速度、肿块可观察时间、肿块可供实验用时间、瘤体大小(以长径为标准)、肿瘤转移、浸润等情况。结果二者接种阳性率分别是100%、80%,可观察到肿瘤时间及可供实验(长径≥0.4 cm)时间分别是8d、16d及29d、41d;生长速度前者快于后者；瘤体4周长径分别是平均约(0.42±0.06)cm、(0.28±0.06)cm；6周分别是平均约(0.75±0.07)cm、(0.52±0.27)cm；均无转移瘤发生，皮肤浸润不明显。结论两种方法中前者生长速度前者快于后者，形成瘤体大小较一致，有利于后续实验。

3、单克隆抗体用于治疗胰腺癌的研究

用人新鲜胰腺癌组织免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Agl4融合，获得了分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以ABC免疫组织化学法检查YPC1单克隆抗体与人正常组织和肿瘤组织的反应性。结果表明YPC1单克隆抗体与16例被检测的胰腺癌组织发生反应。其中9例(56.3％)呈强阳性反应，与23种正常组织中的10种(43.5％)以及19种非胰腺肿瘤中的8种(42.1％)有不同程度的交叉反应，但多数反应较弱。该研究提示以新鲜人体肿瘤组织作为免疫原制备单克隆抗体是简便可行的，YPC1单克隆抗体可能有助于胰腺癌的诊断和治疗。

单克隆抗体edrecolomab（17-1A）由结肠癌细胞株SW1038免疫鼠而获得。该抗体对多种胃肠道恶性肿瘤具有免疫活性。在以往临床治疗胰腺癌的试验中已经显示出部分疗效。

4、治疗胰腺癌的单克隆抗体药物

厄洛替尼（Erlotinib）为抗表皮生长因子受体酪氨酸激酶的单克隆抗体，Erlotinib联合吉西他滨对569例晚期胰腺癌患者的随机双盲的III期临床研究显示，Erlotinib联合吉西他滨相对于安慰剂联合吉西他滨组能提高患者的生存率，并具有较低的不良反应，推荐剂量为100 mg/d。尽管总生存的改善具有统计学意义，但是对于患者总生存的延长仍较为有限，接受厄洛替尼治疗与安慰剂治疗组患者的中位生存时间分别为6.24月和 5.91月，1年生存率分别为23% 和 17%。

MORAb-009是靶向间皮素（mesothlin）的嵌合型单克隆抗体，间皮素作为一种分化抗原，在包括胰腺癌、卵巢癌、间皮瘤在内的多种恶性肿瘤中过表达。MORAb-009用于间皮素表达阳性的恶性肿瘤的I期临床研究中共入组24例患者，其中包括7例胰腺癌患者。研究结果显示，MORAb-009的安全性良好，该研究中入组的患者既往均接受多重治疗，其中11例患者病情稳定。MORAb-009用于间皮素表达阳性的肿瘤的II期临床研究正在进行中。

Mapatumumab为靶向肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducingligand, TRAIL)受体1蛋白的人单克隆抗体，可诱导表达TRAIL-受体1蛋白的人肿瘤细胞凋亡，具有广泛的抗肿瘤活性。Stadel等的研究表明，Mapatumumab联合凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitor of apoptosis，XIAP)抑制剂可诱导大多数胰腺肿瘤细胞系的凋亡。

导致胰腺癌预后极差的原因除了胰腺癌患者就诊时已属于中晚期外，其侵袭和转移的能力仍是制约和影响胰腺癌治疗的关键。如何有效预防、治疗转移瘤是提高肿瘤患者生存率的关键，其转移机制也成为肿瘤治疗领域的热点，使用胰腺癌裸鼠肿瘤模型有助于研究胰腺癌的发病机制、寻求新的治疗手段，为研究转移机制及评估药物或基因治疗对转移灶的疗效提供了良好的实验平台。