如何避免IP检测过程中的重、轻链干扰？

免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与ProteinA/G偶联的agarose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。

在免疫沉淀实验后的WB验证环节中，当使用常规的 Anti-IgG (H+L) 酶标二抗时，通常会出现对应免疫沉淀一抗变性后产生的重链（50kDa）和轻链（25kDa）两条带。如果检测的目的蛋白分子量在此附近时，就会受到这两条带的干扰。

 如何避免IP检测过程中的重、轻链干扰？

一般解决办法：选择不同种属来源的一抗分别进行IP和WB实验，然后再选择无种属交叉反应的二抗进行WB实验；这种方案相对来说比较昂贵，需要买两个一抗和两个对应的二抗。

Abbkine解决方案：产生此问题的重点在于实验中目的蛋白的信号模糊，无法进行判断，那就需要在根本上将干扰的信号降到最低，而IPKine系列二抗经过特别设计和优化，可以和重/轻链特异性结合从而明显看到目的蛋白信号。如果目的条带在55kDa左右，可以通过选择与轻链特异性结合的二抗，来消除重链条带对目的蛋白检测的干扰。如下图：

IPKine是一系列新型的二抗产品，能有效解决IP-WB后的轻/重链干扰问题。IPKine系列二抗经过特别优化，不会与IgG的轻/重链分子结合，只识别IgG分子的重/轻链部分，从而能有效解决IP实验后的WB检测中面临的轻/重链干扰信号降到最低。

另外，IPKine系列二抗经过特别优化，其针对目的种属的特异性非常高，同时针对其他非目的种属的抗体分子的非特异性结合降到最低，从而有效避免了二抗与样本内免疫球蛋白分子的非特异性杂交，提高实验的特异性和信噪比。

本产品使用简单，只需将IPKine系列二抗替代传统的二抗使用即可。无需添加其他额外步骤或者试剂。最终让您得到最干净、最清晰的目的条带。

IPKine Mouse Anti-Rabbit IgG LCS 轻链特异性二抗检测NUP50蛋白的IP结果，完美解决重链干扰问题！

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