氨苄青霉素大肠杆菌重组质粒的筛选与鉴定
2019.8.13
摘要： 学习克隆工作中最常用的双酶切,将外源基因与质粒连接方法及操作技术.
一、实验目的：
1、学习克隆工作中最常用的双酶切；
2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术；
3、学习氯化钙法制备 大肠杆菌 感受态细胞的技术；
4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义.
5、外源质粒 dna 转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术.
6、学习鉴定重组子的方法.
二、实验原理：
重组子的建立：采用双酶切 质粒 载体pbr322和puc18,酶切后产生了互补的粘性末端,在t4 dna 连接酶的作用下,两个质粒片段连接.
感受态细胞(competent cells)：受体细胞经过一些特殊方法(如：cacl,rucl等化学试剂法)的处理后, 细胞膜 的通透性发生变化,成为能容许多有外源dna的载体分子通过......
......
大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化、克隆筛选一 分...
1. 实验目的和要求 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生...
转化克隆的筛选和鉴定——酶切鉴定法-资讯-分析测试百科网...
实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒限制性内切酶缓冲液甘油硫酸镁Tris盐酸琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器镊子微量...
重组子的筛选的原理和方法 - 分析行业新闻
1、 抗生素筛选法:菌株为某种抗生缺陷型, 而质粒上带有该抗性基因(如氨苄青霉素, 卡拉霉素等)这样只有转化子才能在含该抗生素的培养基上长出。本实验利用抗生筛...
抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养及计数 - 分析行业新闻
2、分离单克隆菌落采用平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面,在数次划线后培养,可以分离到由一个细...
抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养及计数-资讯-分析测试百...
接下来喆图小编就来说说抗氨苄青霉素大肠杆菌如何进行分离、培养和计数及实验所需材料和药品 : 待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB固体培养基、LB液体...
氨苄青霉素基因- 分析测试百科网
将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中,转化一种标准大肠杆菌菌株,此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿,... DNA重组(DNA...
质粒的制备-资讯-分析测试百科网wiki版
分析测试,百科网,质粒的制备, 粒的制备可以用于(1)携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用;(2)质粒的分离与提取是最常用、最...
质粒DNA的提取-资讯-分析测试百科网wiki版
分析测试,百科网,质粒DNA的提取, 验概要 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒。实验原理 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑...
胞内晶体蛋白基因的酿酒酵母真核表达 - 分析行业新闻
为此,首先构建一种重组大肠杆菌,其所携带的重组质粒能够在大肠杆菌细胞中复制,在酵母细胞中表达,即大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体。本实验采用了不带ATG起始位点的...
氨苄青霉素对大肠杆菌- 分析测试百科网
氨苄青霉素对大肠杆菌 2020.9.08 [实验原理] (供参考,试剂盒的solution ss成分未知) 细菌处于容易吸收外源dna的状态叫感受态。转化是指质粒dna或以它为载体构建...
、蛋白质的肽指纹图谱检测 4、混合组分的分子量分布检测 5、合成物质的分子量检测与纯度评价 6、重组蛋白的分子量检测与纯度评价 7、蛋白质的多肽谱检测 8、血清多肽谱的检测 9、PEG修饰
与数百名药物学专家共同开发的Lightsight™软件 自动化进行代谢物的鉴定和确证，极大地提高代谢物鉴定的速度和效率
本系统提供了自动化高通量微生物菌种的选育方案，涵括了微生物的分离及纯化、菌株保存、生长监测、分子学鉴定和性状筛选等实验流程。
本系统提供了自动化酵母菌种的选育方案，涵括了微生物的分离及纯化、生长监测、重组菌构建、分子学鉴定和性状筛选等实验流程。
实现mRNA的提取、IVT反转录合成DNA、质粒线性化和重组载体构建、重组载体的电转/脂质体转染、核酸长度和浓度质量控制、细胞成像等性状筛选过程。