适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术

摘要：【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术，并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH 梯度胶条进行双向电泳、PDQuest 7.4 软件比较和分析电泳图谱，利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点。【结果】成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术，获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱。人表皮组织的蛋白质在pH5～8 范围内分布均匀，分子量集中在15～100 ku 之间。银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14；对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析，结果表明Neuhoff 胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析，其在上样量为350 μg时蛋白斑点数达394±9，匹配率为85.53%。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff 胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱，并鉴定为Caspase 14 前体和27 ku 热激蛋白1。【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考，为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础。