橄榄绿链霉菌细胞膜中几丁单、寡糖结合蛋白质的分离、纯化和结合动力学

摘要　橄榄绿链霉菌细胞膜中存在能与N2乙酰葡糖胺特异性结合的蛋白质。采用超声波破碎、超速离心等方法, 分离得到细胞膜后用Triton X2100 抽提, 经连续的阴离子层析后, 可分别得到能与N2乙酰葡糖胺特异性结合的46. 0 kD 和47. 5 kD 蛋白质。底物竞争结合实验证实, 这两种蛋白质还能与其他几丁质降解产物(几丁二糖至几丁六糖) 特异性结合而不与葡萄糖、纤维二糖等结合。采用介质表面感应技术(surface plasmon resonance) 检测出46 kD 蛋白质与几丁单糖至几丁六糖的解离常数( Kd) 在8. 29 ×10 - 9～1. 95 ×10 - 5 mol/ L 之间, 单糖最高而三糖最低。决定其差异的主要因子是底物结合速率( Kon) 而非解离速率( Koff ) 。N 末端氨基酸序列分析结果推测, 该蛋白质属于一个潜在的ATP 结合转运系统。