逆转录病毒（RV）构建与包装

逆转录病毒（RV）构建与包装

定义

逆转录病毒是一类RNA病毒。在逆转录酶的作用下，以病毒RNA为模板合成cDNA,再通过DNA复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。

逆转录病毒载体优点：

1、转染范围广，可以感染各种细胞类型，如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等；

2、转入的外源基因可完全整合；

3、对细胞感染率高，达到100 %；

4、 感染细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源基因。

逆转录病毒载体的缺点:

1、只能整合至分裂期细胞；

2、可插入外源基因片断小（<10kb），难以满足较大基因的插入；

3、病毒滴度是限制临床应用的主要方面；

4、有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能，随机整合可能产生不良作用。

逆转录病毒包装程序

1、将基因克隆到表达载体上，

2、转染逆转录病毒包装细胞系，培养后收集上清制备病毒粗提液，

3、病毒纯化、浓缩（根据客户需要），

4、测定病毒滴度

客户提供

1、含有目标基因的质粒（提供测序图谱）或所要表达的目的基因的名称、序列；

2、所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化

3、若需要检测外源基因的表达，如需要请提供相应的抗体

服务承诺

提供已测定好滴度、可以直接进行后续分析的病毒储存液，重组后的逆转录表达载体质粒

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注：该产品未在中华人民共和国食品药品监督管理部门申请医疗器械注册和备案，不可用于临床诊断或治疗等相关用途