DNA的细胞化学――孚尔根反应（二）
（注意: 这个步骤非常重要，必须用1
mol/L稀盐酸冲洗，因为它可以洗去贴在切片上的试剂的痕迹。如用蒸馏水冲洗，则试剂本身也可以水解，所释放出的碱性品红，可以使切片内一切嗜碱性物质皆染色从而引起严重的错误。若切片较厚，可延长其水解时间，而且每次均需更换洗涤剂）
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蒸馏水冲洗3次（使水解停止）
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Schiff 试剂中染色40min
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用亚硫酸水洗3~5次(以洗去多余的非特异性色素及扩散的染料)
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流水冲洗5 min
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蒸馏水洗片刻
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1%亮绿复染数秒钟
（注意: 复染时间切忌过长，以免染色过深，影响对DNA的观察）
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水洗脱水封片
5．实 验 结 果
细胞核中的DNA呈鲜亮的紫红色反应，它不但反应出DNA存在的部位及其分布情况，而且还可从颜色反应的深浅，来判断DNA的相对含量。细胞质被亮绿复染成绿色，核仁通常为负反应；但在有些材料的细胞质中，DNA也会出现阳性反应。
6．实验报告
（1）. 绘图表示Feulgen反应的染色结果, 并验交Feulgen反应的永久切片1张。
（2）. 总结Feulgen反应染色结果的影响因素。
7．思 考 题
（1）. Feulgen反应的实验原理是什么？
答：DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
（2）. 在稀盐酸水解后，为什么要用亚硫酸水进行洗片？
答：亚硫酸可与碱性品红反应生成品红亚硫酸，从而可以将用schiff剂染色时所残留的碱性品红反应掉，以洗去多余的非特异性色素及扩散的染料。
[ 附 ] Feulgen方法应注意的几个问题：
1. 对照切片的制做
进行Feulgen反应时,
一般要做一对照切片以便验证反应结果。对照切片应不经水解直接放在schiff剂内，且应为负反应。但需要注意的是，对照切片在schiff试剂中最多不要超过1
h (0.5 h即可)，时间过长，试剂本身的酸性也会使DNA水解，从而出现假的正反应。
2. 固定剂的选择
以前很多人认为，选用的固定剂不应含有醛基或含有氧化剂。后来发现含醛基或氧化剂的固定剂对反应的专一性并没有影响。实践证明，一切好的组织学固定剂均适用于Feulgen反应。如Bhampy固定剂、Helly固定剂、Flemming固定剂、OsO4固定剂、Carnoy固定剂、zenker固定剂和
Bouin-Aller固定剂。
但在上述固定剂中，以OsO4和Carnoy效果较好，OsO4(1%或0.5%)是Feulgen反应的理想固定剂，只是因OsO4价钱较贵，故一般多采用Carnoy固定液。在Feulgen反应中，不能单独使用Bouin定液，因为它是Feulgen反应的最坏固定剂，但经Aller改进后的Bouin-Aller固定液效果却较好。
3. 水解时间
Feulgen反应通常用稀酸进行水解，但水解的时间一定要适当。如水解时间不够,
反应就会变弱；如水解时间过长。或水解地过于剧烈，则脱氧核糖也易掉下来，反应也会减弱。适当的水解时间一般为8~12min。但是水解时间长短也要视标本的类型(如厚薄等)、固定剂的性质以及酸的浓度而定。
4. Schiff试剂的作用
Feulgen反应成功与否的一个非常关键的因素，就是schiff试剂的质量。有一大类试剂均称为碱性品红，它们实际上是由几种产品分别组成的。因此只能选用注明“DNA染色反应用”的碱性品红才行。此外，Schiff试剂的配制方法也可影响DNA的染色反应。
