原代细胞富尔根（Feulgen）反应显示DNA
原代细胞富尔根（Feulgen）反应显示DNA
基本原理：
显示DNA的传统方法是富尔根（Feulgen）反应，切片先用稀盐酸处理，DNA经弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。原理同PAS反应，使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响，故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度，适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。
配制试剂：
1. 1mol/L HCL:将8.5ml浓盐酸和91.5ml蒸馏水混合即得；
2. 0.5%亮绿水溶液；
染色步骤：
1. 取培养于盖玻片上的贴壁原代细胞，用Hanks液漂洗三次；
2. 在卡诺（Carnoy）固定液中固定10min，然后蒸馏水洗三次；
3. 移入60℃浓度为1mol/L的HCL中静置10min；
4. 用蒸馏水漂洗几次；
5. 放入Schiff试剂中静置30—60min，可随时检查显色情况；
6. 用自来水冲洗5min；
7. 再用蒸馏水漂洗；
8. 不同浓度梯度乙醇溶液脱水；
9. 用二甲苯透明、树胶封片；
结果：
原代细胞核内DNA显紫红色，细胞质呈绿色；
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