蛋白激酶D在UDP诱导的小神经胶质细胞胞吞和胞...（二）
FITC-葡聚糖（绿色），Fluo555-β淀粉（红色）直接加入细胞培养基中，之后细胞用UDP或（CID+UDP）孵育60分钟，之后HBSS洗涤细胞5次，洗去培养基中残留的葡聚糖和淀粉。这部分图片由共聚焦拍摄而成。
实验2总结： 在UDP的诱导下，可看到小神经胶质细胞会出现增强的胞吞作用（与对照组相比较）；而CID抑制剂的存在会抑制胞吞。
3.UDP诱导的PKD磷酸化以及膜转运。
A:100uMUDP诱导不同时间的细胞以及PMA（100nM）诱导15分钟的细胞，分别在诱导后裂解以及注入WESTERN磷酸化抗体检测PKD磷酸化情况；
B: 不同浓度的UDP诱导细胞3分钟后，洗去诱导剂，裂解细胞并WESTERN检测PKD的磷酸化；
C: 经100uM UDP不同时间（1min,15min,60min）诱导,以及PMA（100nM）15min诱导的小神经胶质细胞，固定并染色，在共聚焦下观察PKD的细胞分布。
实验3总结：A:
在UDP1-45min的刺激时间段内，PKD两个位点的磷酸化都有增强，PMA也在两个位点促进了磷酸化。B:UDP对PKD的磷酸化促进作用呈现出剂量依赖的方式。C:PKD在UDP诱导1min时，开始在细胞膜处聚集，而此处也同时聚集着F-actin；诱导
10min后，PKD开始向液泡边缘聚集，并持续到60min诱导的细胞中，与阳性对照PMA诱导组的细胞分布状态相同。
4.PKC/PKD抑制剂对UDP诱导的PKD激活的影响。
实验通过检测UDP激活PKD后的磷酸化以及膜转运和液泡行程的情况：
A: 细胞先由三种PKC/PKD抑制剂预处理10min，之后加入UDP（100uM）诱导3min, Western 检测PKD 的磷酸化情况；
B: 细胞先由三种PKC/PKD抑制剂预处理10min，之后UDP（100uM）诱导1min,固定并做细胞染色，共聚焦观察F-actin,PKD与细胞核相比较的定位分布,进而分析PKD的膜转运分布；
C: 细胞先由三种PKC/PKD抑制剂预处理10min，之后UDP（100uM）诱导60min，待液泡形成后，比较四组实验中的液泡行程情况。
实验4 总结： A:Go83（1uM）可一直PKD在Ser744的磷酸化，而Go76（1uM）和CID（50uM）却对其磷酸化无影响；B: PKD的质膜转运和肌动蛋白的质膜聚集可被Go83（1uM）抑制，可被Go76（1uM）和CID（50uM）部分抑制；C: 肌动蛋白的质膜聚集并不三种抑制剂的影响，但在CID抑制剂存在的细胞中，液泡的形成也受到了抑制，其他抑制剂对液泡及肌动蛋白均无明显影响。
5.PKC/PKD抑制剂对UDP诱导的微粒体吞噬的影响。
细胞先由三种PKC/PKD抑制剂预处理10min，之后加入UDP（100uM）诱导60min, 荧光显微镜观察细胞形态变化。
实验5总结：UDP诱导形成的微粒体吞噬，Go83（1uM）对其没有影响，而Go76（1uM）和CID（50uM）均可抑制其形态上的变化。
结论：总结上述一系列实验结果，UDP可诱导小神经胶质细胞在对外来免疫活性物质应对性的产生液泡，并上调PKD的磷酸化并促进其质膜转运，但这些调控似乎与PKC/PKD各亚型磷酸化抑制剂并无直接关系；所以推论UDP
可诱导与PKC途径无关的PKD磷酸化与膜转运，且此途径与小神经胶质细胞的吞噬作用无关；但在持续的细胞膜运动和液泡形成过程中，此PKC独立的PKD激活途径参与其中，并可促进小神经胶质细胞的胞吞和胞饮作用。
对于小神经胶质细胞胞吞作用中PKD 的功能研究上，一直存在争议，此篇文章采用了活细胞动态分析的实验技术是一大亮点，YOKOGAWA 的活细胞动态观察系统CV1000 完成了此文章中大部分的动态捕捉视频，使得数据的可靠性真实性大大提高。
