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细胞传代培养具体的操作步骤和注意事项

2021.6.11

悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用离心法后,加入新培养基后再吹打分散进行传代

贴壁细胞实验需准备超净台喷洒酒精,紫外照射30min。准备好培养瓶/皿,离心管,10%DMEM,0.25%胰酶,D-hanks液等,带上手套,口罩等,倒去旧培养基,用D-hanks液清洗一遍,去除沉积的死细胞等。

加入2ml 0.25%胰蛋白酶消化液,消化2~3min,倒置显微镜下观察,待细胞单层收缩突起出现空隙时,倒去酶液。加入1~2滴管含有血清的培养液,反复吹打细胞,使其成细胞悬液。

以1:2或1:3进行分装,补充新鲜培养基,并在培养瓶上做好标记,注明代号、日期,轻轻摇匀,37℃CO2培养箱培养。细胞培养24h后,即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。


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