| 实验步骤 | 注意：由于基因枪通过高压使粒子加速到极高的速度，故操作基因枪时应采取适当的安全措施并且佩戴安全眼镜。
在任何使用基因枪转化的实验中，必须设置对照检测分化和选择效率（见注 40) 。
( 1 ) 根据 PDS-1000/He (见图 4.2 ) 基因枪操作指南操作，将 DNA 包埋的金粉 ( 见第 3.2 节步骤 2 ) 转到组织中。下面的参数是按照标准设置的（见注 41) 。距离 2.5 cm（破裂盘到载体膜之间距离），阻挡板孔径 0.8 cm （载体膜到终止屏之间的距离），目标距离 5.5 cm（终止屏到被轰击样品平板距离），真空度 91.4~94.8 kPa，真空流速 5.0，排气流量 4.5 [ 8]。
( 2 ) 用 90% 乙醇对基因枪表面及样品室进行消毒，使乙醇能够完全蒸发。
( 3 ) 用无水乙醇浸没载体膜及其固定器、终止屏和破裂盘。放置在超净台使乙醇完全挥发（注 42) 。将载体膜放置在固定器中，然后放在无菌的 6 cm 培养皿中。
( 4 ) 短暂涡旋混匀金粉-DNA 复合体颗粒（见第 3.2 节步骤 2 ) ，取出 5 μl 点在载体膜中央，晾至完全干燥。注意自然干燥，不要在超净台中干燥（见注 43 ) 。
( 5 ) 将破裂盘（650 psi 或 950 psi) 放在破裂盘挡盖中间（图 4.2 ) 拧到气体加速器上，用专用板拧紧（见注 44) 。
( 6 ) 将终止屏放在固定巢内。把载体膜固定器反过来，含有金粉-DNA 复合体的一面朝下放在终止屏上方，使用固定环保持其位置。将固定巢装在第二个架子上，使其距离顶部大约 2.5 cm (见图 4.2) 。
( 7 ) 将样品放在轰击室中适当的位置，第四个架子距离上方大约 5.5 cm。
( 8 ) 抽真空，当真空度达到 91.4~94.8 kPa 时，激发（见注 45) 。
( 9 ) 轰击后，释放轰击室真空，取出样品和拆卸装置，丢弃破裂盘和载体膜（见注 46) 。
( 1 0 ) 如果要接着使用，将载体膜固定器和终止屏用无水乙醇灭菌； 或者将它放入 1：10 稀释的消毒液（Novartis Consumer Health, West Sussex， UK) 浸泡。使用前用超声波处理 10 min (见注 47 ) 。 展开 |
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