熟地黄及其多糖中枢抑制作用研究
摘要:目的:研究熟地黄及其多糖的中枢抑制作用。方法:通过小鼠自发活动实验、抗惊厥实验、镇静催眠实验观察熟地黄及其多糖对中枢的抑制作用。结果:熟地黄煎液、熟地黄多糖均能够抑制小鼠的自发活动;缩短阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期,延长睡眠时间;延缓异烟肼惊厥的发作潜伏期,减少动物死亡数。结论:熟地黄煎液、熟地黄多糖对中枢神经系统具有抑制作用。
在以往的研究中发现,地黄有一定的中枢抑制作用,但关于熟地黄的中枢抑制作用尚未见研究报道。鉴此,我们进行了熟地黄及其多糖的中枢抑制作用研究。
1 实验材料
1.1 实验药品
熟地黄煎液:熟地黄为玄参科植物地黄Rehmanniagluti2nosa Libosch干燥根的加工品。生地黄购自原产地武陟,经中药鉴定教研室陈随清教授鉴定确认。参照《中国药典》(2000年版,一部)酒炖法炮制成熟地黄。熟地黄加水煎煮,第一次加入6倍量水,煮沸1 h ,第二、三次均加入4倍量水,煮沸1 h ,合并滤液,浓缩至1∶1(1g/ ml) ,冰箱冷藏(4℃)备用,用时按需要稀释。熟地黄多糖:熟地黄干燥品,以95 %乙醇8倍量、6倍量、6倍量依次回流提取4 h、3 h、3 h ,药渣置通风处晾干;药渣分别加水10倍量、8倍量、8倍量,于90℃～100℃水浴依次温提4 h、3 h、3 h ,过滤,合并滤液,离心15 min ,得上清液,浓缩至1∶1(1g/ ml) ,用95 %乙醇调含醇量至80 % ,静置过夜,抽滤得沉淀。取粗多糖加水溶解,加入等体积30 %三氯乙酸溶液,静置离心,上清液用0. 01 mol/ L的氢氧化钠调p H =7 ,减压浓缩,浓缩液流水透析,将透析液减压浓缩至适当体积,加入95 %乙醇调含醇量至80 % ,放置,抽滤,沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤,真空干燥,得粗多糖。用时按需加蒸馏水配成溶液。地西泮:购自河南中医学院第三附属医院,天津制药厂生产,批号: 0305004 ,规格: 5 mg/片。用时研成粉末,用0. 5 %CMC - Na配成药液。
1.2 实验动物
昆明种小鼠,豫医动字410115 ,普通级,体重为(20±2) g,雌雄兼用,购自河南省医学实验动物中心。
1.3 主要仪器和试剂
小鼠自主活动测试仪:成都泰盟科技有限公司生产;戊巴比妥钠: Serva 公司,上海化学试剂站分装;异烟肼:上海信谊药业有限公司生产,批号:040301 ,规格:100 mg/片。
2 实验方法
2.1 分组与给药
动物购入后适应性饲养2d ,随机分为4组:对照组,地西泮组,熟地黄多糖组,熟地黄煎液组。各组给药情况如下:对照组灌胃生理盐水;地西泮组前4 d灌胃生理盐水,后3 d灌胃地西泮药2. 5 mg·kg-1·d-1;熟地黄多糖组前4 d灌胃生理盐水,后3 d灌胃熟地黄多糖0. 5g·kg-1·d-1;熟地黄组灌胃熟地黄水煎液8g·kg-1·d-1给药7 d。给药期间小鼠自由进食饮水。
2.2 自发活动实验
实验于末次给药60min后进行。用小鼠自发活动仪测定记录各组小鼠10 min内活动次数。
2.3 阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠实验末次给药60 min后,各组小鼠分别腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg·kg- 1) 。以给药到翻正反射消失的时间为入睡时间,即睡眠潜伏期(min) ;从翻正反射消失到恢复苏醒的时间为睡眠持续时间(min) 。观察记录实验期内小鼠的睡眠潜伏期和睡眠持续时间,观察时间以60 min为限,超过者均以60 min计算。
2.4 异烟肼致小鼠惊厥实验
末次给药60 min后,各组小鼠分别腹腔注射异烟肼(300 mg·kg-1) 。观察记录小鼠60 min内出现阵挛性和强直性癫痫的时间作为发作潜伏期(min) ,观察每组动物死亡数。
3 实验结果
3.1 熟地黄及其多糖对小鼠自发活动的影响与对照组比较,地西泮、熟地黄多糖可显著地减少小鼠自主活动次数, P<0. 01 ,P<0. 05 ;熟地黄煎液有减少小鼠自主活动次数的趋势。熟地黄多糖、熟地黄煎液与地西泮三组间比较无显著性差异(P>0. 05) 。
3.2 对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠的影响与对照组比较,地西泮显著地缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0. 05) ,延长睡眠时间(P<0. 01) ;熟地黄多糖可显著地缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0. 05) ,延长睡眠时间(P<0. 05) ;熟地黄可显著地缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0. 05) 。熟地黄多糖组、熟地黄煎液组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0. 05) 。3.3 对异烟肼致小鼠惊厥的影响与对照组比较,地西泮可显著地延缓异烟肼惊厥发作潜伏期(P<0. 05) ;熟地黄多糖有延缓异烟肼惊厥发作潜伏期作用;熟地黄煎液可显著地延缓异烟肼惊厥发作潜伏期(P<0. 05) ;熟地黄多糖组、熟地黄煎液组与地西泮组三者组间比较无显著性差异(P>0.05) 。三者均能使60 min内动物死亡数减少。
4 小结
实验结果表明,熟地黄煎液、熟地黄多糖均能够抑制小鼠的自发活动;缩短阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期,延长睡眠时间;延缓异烟肼惊厥的发作潜伏期,减少动物死亡数。因而,熟地黄煎液、熟地黄多糖对中枢神经系统具有抑制作用,其作用机制有待进一步研究。
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焦点事件
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