原代肾上皮细胞培养实验
实验方法原理 |
将自皮质切除的组织快切成碎块,冲洗后放入胶原蛋白酶和胰蛋白酶混合液,摇晃消化。定时用吸管研磨组织块,然后收集分离的细胞。用一定孔径大小的滤网过滤细胞悬液,除去未消化的组织块。然后,洗细胞,清除消化酶。用添加血清的培养液混悬细胞,将细胞接种于塑料培养器皿。 |
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实验材料 | 肾组织片 |
试剂、试剂盒 | DMEM FBS 胶原蛋白酶 胰蛋白酶 |
仪器、耗材 | 手术刀 组织镊 有轨振荡器 培养皿 培养瓶 试管 滤网 |
实验步骤 |
一、材料
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注意事项 |
1. 在原代培养初期,培养液的含量在3ML以下,最适宜的为1-1.5ML,仅够保持植块湿润即可。 2. 在扔入垃圾前,应该用次氯酸盐处理剩余组织和使用过的试管、吸管、培养皿。 3. 培养液需要在无菌的环境下才能打开,避免污染。
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其他 |
肾小管上皮细胞的鉴定:将培养的肾小管上皮细胞置于放有盖玻片的24孔培养版上,待细胞生长至占有培养面积约80%时,取出盖玻片,PBS洗片。甲醇-20摄氏度固定5min,PBS洗片,加10%羊血清37℃封闭30min,PBS洗片,加兔抗人角蛋白18抗体,阴性对照PBS一抗,37℃反应1h,加FTTC标记的羊抗兔lgG(1:200),37℃避光反应45min,
PBS洗片,90%甘油封片,荧光显微镜观察染色结果。 展开 |