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免疫酶细胞化学技术中的双PAP法检测微量抗原

2020.7.07

在复合物体系中连接更多的PAP复合物,来进一步放大抗原,从而使灵敏度更为增强,适用于检测微量抗原。

实验方法:

  1.  将固定后的标本用PBS漂洗;

2. 于室温下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min,用来密封内源性过氧化物酶;

3. PBS漂洗2次,每次3min;

4. 在室温下用二抗的正常血清孵育20min;

5. 滴加一抗后在室温下放置1h或4℃冰箱内过夜;

6. PBS漂洗3次,每次3min;

7. 滴加二抗后于室温放置30min;

8. 重复步骤6;

9. 加PAP复合物,室温60min;

10. 重复步骤6;

11. 第二次滴加酶标二抗;

12. 用PBS液反复漂洗;

13. 第二次加PAP复合物;

14. 重复步骤12;

15. 将标本置于0.04%DAB+0.03%H2O2的溶液中显色5~10min;

16. 用苏木精复染后封片,镜检。


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