免疫酶细胞化学技术中的双PAP法检测微量抗原
在复合物体系中连接更多的PAP复合物,来进一步放大抗原,从而使灵敏度更为增强,适用于检测微量抗原。
实验方法:
将固定后的标本用PBS漂洗;
2. 于室温下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min,用来密封内源性过氧化物酶;
3. PBS漂洗2次,每次3min;
4. 在室温下用二抗的正常血清孵育20min;
5. 滴加一抗后在室温下放置1h或4℃冰箱内过夜;
6. PBS漂洗3次,每次3min;
7. 滴加二抗后于室温放置30min;
8. 重复步骤6;
9. 加PAP复合物,室温60min;
10. 重复步骤6;
11. 第二次滴加酶标二抗;
12. 用PBS液反复漂洗;
13. 第二次加PAP复合物;
14. 重复步骤12;
15. 将标本置于0.04%DAB+0.03%H2O2的溶液中显色5~10min;
16. 用苏木精复染后封片,镜检。
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