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反义RNA技术要素

2022.4.07

[1]长的反义RNA并不一定比短的反义RNA更为有效;

[2]在原核生物中针对SD序列及其附近区域的反义RNA可能更有效;

[3]在真核生物中,对应于5'端非编码区的反义RNA可能比针对编码区的反义RNA更有效;

[4]尽量避免在反义RNA分子中出现自我互补的二级结构;

[5]设计的反义RNA分子中不应有AUG或开放读框,否则该反义RNA亦会与核糖体结合而影响其与靶mRNA的配对结合;

[6]进一步还可以将带有ribozyme结构的RNA连在反义RNA的3'端尾上,当反义RNA与靶mRNA杂交后,即可利用其酶活性来降解靶mRNA。

此外,为了增强反义RNA的作用,还可以采取一些额外措施,例如:

[1]由于反义RNA对靶mRNA的抑制作用有剂量依赖性,所以在构建反义RNA基因时,要选择强的、可以诱导的启动子以增强反义RNA本身的表达;

[2]构建许多个反义RNA基因串连在一起,以得到线性重复的多拷贝基因,对提高反义RNA的表达也有利;

[3]RNA酶Ⅲ可以降解RNA:RNA杂交体,所以在构建反义RNA基因时,可将RNA酶Ⅲ的基因也同时转化到靶细胞中并进行表达。这样,当反义RNA与靶mRNA结合后,RNA酶Ⅲ即可将其降解。这显然有利于反义RNA的抑制作用;

近年来,有关反义RNA的研究进展迅速,已经应用到抗病毒感染,研究癌基因的作用机制,探索肿瘤治疗的可行途径等方面。在今后一段时间内,有关反义RNA的研究肯定将会有更加迅速的进展和更广阔的应用前景。

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