生物样品分离技术--盐析法
盐析法
利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。在低盐浓度下,蛋白质溶解度随着盐浓度的升高而增加,称为盐溶作用。当盐浓度不断升高时,不同蛋白质的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,称为盐析作用。这是由蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团的静电引力造成的。由于水中加入了少量的盐,增加了溶液的极性,减弱了蛋白质分子间的作用力,促使其溶解度增大。当盐浓度增加到一定程度时,水活度被降低,蛋白质表面的电荷大量被中和,水化膜被破坏,白质分子又相互聚集沉淀析出盐析法的优点是对设备和条件要求低,安全,应用范围广泛,一般可在室温下操作常用的中性盐有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。硫酸铵的盐析能力强,饱和液浓度大,溶解度受温度影响小,一般不会使蛋白质变性。缺点是缓冲能力差,pH值常在4.5～5.5。
盐析时要注意以下几个问题。
①盐的饱和度影响 盐的饱和度是影响蛋白质盐析的重要因素,不同的蛋白质盐析所要求的饱和度不同。
②pH值的选择 蛋白质在等电点(pI)时的溶解度最小,最易从溶液中沉淀析出,因此进行盐析时的pH值要选择在被沉淀蛋白质的pI附近。
③蛋白质浓度的影响 在相同盐析条件下蛋白质浓度越大,越易沉淀。
④温度的影响 一般可在室温下进行。
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