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荧光定量PCR实验中无Ct值出现的原因

2022.10.19

(1)反应的循环数不够:一般要在35个循环以上,但是过多的循环次数可增加背景值。

(2)检测荧光信号的步骤有误:SYB-Rgreen法(SG法)采用的是72延伸时采集荧光信号,Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。

(3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性,若是电泳条带呈弥散状,可考虑重新合成引物或探针。

(4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。

(5)模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

(6)序列或者引物有误:检测样品中不含有待检测基因。


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