PCR反应结束无扩增曲线出现的原因
扩增效率问题：电泳检测qPCR反应产物，观察是否有目的条带出现。
如果没有，则需要逐一排查引物、模板以及反应条件问题；
确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过 PAGE 电泳检测完整性，以排除引物降解的可能性；
模板浓度太低或目标基因表达丰度过低：减少稀释度，重复实验，一般未知浓度的样品。
通常基因表达检测所需的cDNA量为1-100ng。如样本中目的基因丰度很低，就需要更多的样本量。如果对期望的表达水平不是很确定，可重新查询文献或 NCBI Unigene数据库中EST表达数据来预估在不同组织中的表达水平；
模板降解：重新制备模板，重复实验；逆转录问题：与低表达量相关，如果目的基因在样本中的丰度很低，需要增加实验的灵敏度。确认一下qPCR反应中没有加入过量的cDNA (最大加样水平为 20% v/v)，因为过量的cDNA样本会引入抑制剂降低反应效率。
也可以检查一下逆转录酶和引物。随机引物通常比基于oligo(dT) 的方法产生更多的 cDNA。另外，有些逆转录酶经过热稳定性改造，也会提高cDNA产量。
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