利用cND A微阵列技术可用于:(1)并行分析检测成千上万个基因的表达情况;(2)在新基因的发现、基因组功能的研究、疾病的预测和诊断、药物靶标的确定和药物毒性预测等多方面发挥着重要的作用。
实验方法原理 | 大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带poly(A)的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。 |
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实验材料 | RNA |
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试剂、试剂盒 | NaOH寡聚脱氧胸苷纤维素poly(A)样品缓冲液LiClEDTATE乙酸钠 |
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仪器、耗材 | 离心机分光光度计摇床 |
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实验步骤 | 1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱,然后用水冲洗。
2. 取0.5 g oligo(dT)纤维素干粉加1 ml 0.1 mol/l NaOH中,倒入柱内,以约10 ml 水冲洗。 3. 用10~20 ml 加样缓冲液平衡柱子,至流出液pH约7.5。 4 于70℃加热含2 mg 总RNA的水溶液10 min,再用10 mol/l LiCl调节溶液中LiCl至终浓度0.5 mol/l。 5. 加RNA溶液至oligo(dT)柱,并以1 ml poly(A)加样缓冲液洗涤,将流出液重新上柱2次以上。 6. 用2 ml 中度洗脱缓冲液洗柱子,用盛有2 ml 2 mmol/l DETA/0.1%SDS的试管收集洗脱的RNA溶液。
7. 按步骤2重新平衡柱子,重复步骤2~4的poly(A)选择吸附和冼脱过程。
8. 调整收集的RNA溶液的乙酸钠浓度至0.3 mol/l,加2.5倍体积乙醇,移至2个硅化的离心管中,-20℃放置过夜或干冰/乙醇中30 min。
9. 于4℃ 304 000 g 离心如沉淀RNA。弃去乙醇,晾干沉淀,重溶于150 ul 无RNA酶的TE缓冲液,合并样品。
10. 取5 ul 在70℃加热5 min 后,在1%琼脂糖凝胶电泳中检查RNA的质量。 收起 |
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其他 | 来源于《cDNA微阵列技术中内标 Poly (A )+ RNA 的制备》 |
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