高速逆流色谱法分离茶黄素条件的优化
摘 要：优化高速逆流色谱分离4 种茶黄素的方法。两相溶剂系统为正己烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 水- 冰醋酸(1:5:1:5:0.25，V/V)，固定相为体系的上相，下相为流动相，流速为2ml/min，仪器转速700r/min，进样量30mg。从茶黄素复合物中分离纯化得到茶黄素、茶黄素-3- 没食子酸酯、茶黄素-3＇- 没食子酸酯和茶黄素-3, 3＇- 双没食子酸酯，尤其使得两种酯溶性茶黄素(茶黄素-3- 没食子酸酯、茶黄素-3＇- 没食子酸酯)达到较好的分离。
关键词：高速逆流色谱；分离；茶黄素
茶黄素是多酚类物质氧化形成的一类能溶于乙酸乙酯的、具有苯并卓酚酮结构的化合物的总称，其中茶黄素(TF1)、茶黄素-3- 没食子酸酯(TF2A)、茶黄素-3＇-没食子酸酯(TF2B)和茶黄素-3,3＇- 双没食子酸酯(TF3)是红茶中4 种主要茶黄素[1-2]。红茶中茶黄素类的含量一般为0.5%～2.0%，它们是红茶中的主要成分，对红茶的色香味及品质起着决定性的作用，是红茶汤色“亮”
的主要成分，滋味强度和鲜爽度的重要成分[ 1 - 2 ]。茶黄素不仅是红茶的重要品质成分，而且具有多种与人体健康有关的潜在功效，有降血脂、抗氧化、抗肿瘤、抗突变、抗病毒等作用[ 3 - 1 1 ]，因而受到国内外广泛关注，并成为研究热点。
由于结构的相似性，茶黄素类物质单体的分离非常困难，而直接从红茶中分离茶黄素单体更加困难, 在国内外都很难买到茶黄素单体的标准品。为此，研究如何利用酶工程合成茶黄素，具有重要的理论与实际意义。同时，如何采用高效分离方法制备分离茶黄素单体，对茶黄素的科学研究和药理功能研究有极大的推动作用。茶黄素的分离主要采用Sephadex LH-20 柱色谱[12-13]、制备高效液相色谱[14-15]和高速逆流色谱[12-13;15-17]法。高速逆流色谱(HSCCC)是一种不使用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术。它无需任何固态载体，而是借助螺旋管的同轴行星式运动实现固定相的高保留以充分分配分离，避免了分离样品与固态载体表面发生化学反应而变性和不可逆吸附等情况。每次分离样品结束后，管道中残留溶剂均可冲出，不会对后续分离产生任何影响，因而分离样品均具有高回收率[18]。HSCCC 已应用到茶黄素的分离[12-13;15-17]，但是两种酯性茶黄素的同分异构体(TF2A，TF2B)未达到较好的分离。本研究利用多酚氧化酶氧化儿茶素体外合成茶黄素[19]，并应用HSCCC 从茶黄素复合物中成功分离纯化出4 种茶黄素单体，尤其使得两种酯性茶黄素达到较好的分离。
