细胞瞬时转染
细胞瞬时转染
| 实验方法原理 |
通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。 |
|---|---|
| 实验材料 | 细胞样品 |
| 试剂、试剂盒 | FuGENE 6 脂质体 |
| 仪器、耗材 | 电穿孔 |
| 实验步骤 |
一般流程： 1）细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖。 2）细胞转染（脂质体、电穿孔、FuGENE6等） 3）48小时以后鉴定目的基因的表达情况。 前期准备： l构建好的外源基因载体，或目的基因基本信息。 l待转染的细胞系（1×106个细胞，可传代，倍增时间小于48小时）以及细胞培养条件的说明。 l若需要检测靶基因的表达，请提供相应抗体。
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| 注意事项 |
1. 转染48——72h后可检测基因表达。如用于重组蛋白、抗体生产等。 2. 由于各实验操作细节可能不同，建议转染前可做优化实验，确定sinofection转染试剂与DNA的最佳比例。 3. 如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.5ml无血清培养基。
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| 其他 |
在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。
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