莱克多巴胺和瘦肉精的前处理及检测
方案优势
简单,快速,准确。
采用标准
国家相关标准
方法/原理/步骤
猪肉猪肝中莱克多巴胺和瘦肉精的前处理
1.萃取
5g匀浆样品加25ml乙腈和25ml 0.1mol/l的盐酸溶液,(加入内标);漩涡10min,离心后取上清液30ml,待过柱。
2.SPE净化
a.活化:用5mL甲醇和5mL水分别预淋洗柱管;
b.上样:将处理好的样品载入SPE柱管;流速控制在1ml每分钟;
b.淋洗:分别加入3mL水和5 mL甲醇进行淋洗,并将柱床通空气抽干;
d.洗脱:用5mL%氨水甲醇溶液洗脱,收集洗脱液。
3.衍生化
将上述2.d中的洗脱液氮气吹干; 70℃烘箱烘20min;加入100ul的BSTFA衍生化试剂,涡旋混匀; 70℃烘箱加热90min(如果用99%的BSTFA,时间为40min);冷却至室温后,氮气吹干;加入200ul甲苯,进GCMS。
实验步骤:
1.酸化乙醇的制备:60%的乙醇(v/v),100ml,加入0.5ml浓盐酸
2.标准溶液的制备:称取适量盐酸克仑特罗,用甲醇稀释成10ppm的标准溶液
3.样品的提取及其衍生化
取约10mg(准确至0.001g)经匀浆后的猪瘦肉于150mL锥形瓶中,加30mL酸化乙醇,用玻璃棒搅散肉团,于振荡器上振摇提取15min,全部转入离心管中,以3000r/min离心15min,合并上清液,用2mol/LNaOH液(约2mL)调pH>12,将其导入100mL具塞量筒内,用正己烷(5mLx3)提取,合并正己烷提取液于50mL烧杯中,70℃水浴挥去正己烷至1mL左右,将残留液转入具塞浓缩瓶中,烧杯用0.5mL正己烷洗涤,洗液并入浓缩瓶中,用N2气吹干溶剂,向残渣中加入0.05mL BSTFA,塞上瓶塞,放入75±5℃的烘箱中,衍生90min,取出浓缩瓶,冷至室温后,用N2气吹去BSTFA,残渣用0.05mL甲苯溶解,密塞待测。
4.标准溶液的衍生化:
将1.0ug的克仑特罗标准液放于10比色管中,加入1mL酸化乙醇混匀,加入2mol/L NaOH液,pH>12后,用2mL正点己烷提取,吸出正己烷,溶液再用2mL正己烷提取,合并正己烷提取液,加入100ul乙酸乙酯或乙腈,再加入100ul BSTFA,密闭,80℃加热90min,冷却到室温,吹干,加入100或50ul甲苯,溶解待测。
5.分析条件:
100℃(1min),20℃/min,270℃(10min)
监测离子:86,187,243,262.277
6莱克多巴胺: 179,250,267,502
仪器设备
试剂:
1.BSTFA衍生化试剂(N-O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺)与三甲基氯硅烷的混合液(99:1);2.色谱级乙醇,浓盐酸(分析纯);乙酸乙酯(色谱级);甲醇(色谱级);氢氧化钠(分析醇);甲苯(色谱级)
其它:
分析天平(0.0001g),10ml容量瓶(5个), 50ml容量瓶(5个),电子移液枪(500ul, 100ul),锥型瓶(150ml,5个);匀浆机(1台),玻璃棒,振荡器(1台),离心机(5000r/min), PH试纸,分液漏斗(250ml),铁架台,烧杯(100ml, 50ml),氮吹仪,浓缩瓶,恒温水浴锅,烘箱。