iTRAQ蛋白质组学研究原理、优势及实验流程介绍
大家好，我是黄博，吉凯一小兵，蛋白质组学实验狗。今天的故事是一个作文从没及格过的闷骚理科男（我一直是这么定位自己的）是如何被陈博内个大尾巴狼生生逼来写文章的故事，真的是有血、有泪、有shi！情节需要，中间可能会穿插一些技术方面的内容，请各位自动忽略。
那是一个月黑风高的晚上，本人和大尾巴狼（我实在不想提他的名字，下同）在机场大巴上，当时我正托腮凝视窗外，撩人的夜色多么沉醉……
“黄博！”大尾巴狼忽然说：“这阵子你手上工作开展的还行，接下来要接手一些新的工作内容，你猜猜我想要你干什么？嘿嘿嘿”
我还小啊，宝宝不懂事啊，为了表示工作积极，就说了句：“是不是要开始写微信文章了？”
谁知大尾巴狼立马兴奋起来：“对啊，你不说我还没想到，近年来随着蛋白质组学的迅速发展，其相应的方法学研究也取得了巨大的进步， 一系列新技术融入了蛋白质组学研究中，iTRAQ就是其中比较有优势的一项，你就写几篇关于iTRAQ的文章吧，一周后给我。”
“Pia！！！”
我反手一个大嘴巴子以迅雷不及眼耳盗铃之势抽在了自己脸上，“让尼玛嘴欠！”心里说着不要嘛，可嘴上还是诚实地答应了下来。
……
一周后。
“黄博，你的文章怎么样了？”
“哦，我写了个草稿，陈博你帮我看看，给润润色呗。”怀着忐忑与期待的心情把稿子发给了大尾巴狼。
没过半小时，回我：“你这写的神马破玩意儿，跟翔一样，言之无物，你得说明为什么要研究蛋白质组学，都是怎么去研究的？”
“为什么要研究蛋白质组学：蛋白质组（proteome）是Williams和Wilkins于1994年首先提出的一个概念，指一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质，是对应于一个基因组的所有蛋白质构成的整体。蛋白质是生命活动中功能的直接行使者，因此从这一水平上去探索生命现象和规律已成为研究生命科学的主要手段。不同时期、不同条件下蛋白质表达水平变化，识别功能模块和路径，监控疾病的生物标志物等等，这些研究都需要对蛋白质进行鉴定和定量。经过二十几年的发展，定量蛋白质组学研究方法也不断成熟，为蛋白质差异表达分析提供了更可靠、动态范围更广的研究手段。”
大尾巴狼：“好，在这个基础上好好写，下周给我。”
……
又一周后。
“黄博，你的文章怎么样了？”
“内什么，陈博，实在憋不出来啊，我都喝了一箱六个核桃了，还是没写出来，要不让我做一星期WB实验代替写文章吧？……”
“GUN！！！我们的WB现在都用WES自动设备跑了，要你何用？你在上周草稿的基础上再丰富一下看看！我问你，研究定量蛋白质组学的方法有那么多种，为毛要选择iTRAQ啊？”
“内个……是因为双向电泳对蛋白质的分离受到蛋白丰度、等电点、分子量以及疏水性的限制，且操作复杂，难以实现自动化，已逐渐趋于被淘汰；基于质谱的非标记定量法无需同位素标记，经济、高通量且省时省力，但该技术过度依赖于仪器的状态、样品的复杂性和一些未知因素，由于目前质谱水平的限制，它的灵敏度及准确性都比不上标记定量法；基于质谱的体内标记法虽具高效、灵活、高通量和定量精确等特点，但该技术是体内标记，能标记样品量少，周期长，不能对不同组织来源的蛋白进行分析，且成本太高；同为基于质谱的体外标记法，与iTRAQ相比，ICAT能标记的样品量少，且分子量相对较大，标记时间长，容易发生氨基酸局部衍化……”
“那iTRAQ的原理是什么，有哪些优势？”
“iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）技术由美国AB SCIEX公司研发，最早于2004年美国质谱年会上被提出，是一种基于体外等重同位素标记的相对定量技术。该技术利用同位素试剂标记多肽，经高分辨质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白质表达量，同时兼具灵敏度高、分离能力强、适用范围广、高通量、结果可靠和自动化程度高等优点。iTRAQ 技术已成为目前定量蛋白质组学中一个十分重要的技术，其作用已经在许多生物体和组织研究中得到证明。
iTRAQ试剂由三部分组成：报告基团（Report Group），平衡基团（Balance Group）和肽反应基团（Peptide Reactive Group）。肽反应基团可与肽段N-端或赖氨酸侧链发生反应形成共价键从而完成对肽段的标记。”
大尾巴狼：“这不挺好吗，再好好改改，端午节后上班之前必须给我！”
……
节后上班前一天晚上，我点了大尾巴狼的秋秋……
“陈博，iTRAQ文章好难写啊！”
“少废话，稿子先给我看看。”
文件传输中……
“写你妹呀，你这不还是上周的内容吗，就没怎么改啊！”
“哦……”
“哦你个头啊，你讲完原理，不要讲讲iTRAQ是怎么做的，实验流程是怎样吗？”
“iTRAQ实验流程：分为预备实验和正式实验两部分（见下图）。预备实验中蛋白质定量跑胶以及预质谱数据库比对结果为重要质量控制点，其目的在于质控和评价蛋白质质量和样本间的蛋白表达谱平行性、蛋白质总量和浓度以及查询的蛋白质序列数据库选取是否合理。正式实验是在预备实验的基础上进行， LC-MS/MS串联质谱中，一级质谱时，平衡基团可以确保无论用哪种报告离子标记的肽段都显示为相同的荷质比，这样一来，不同来源的相同肽段在此时都表现为一个峰；在二级质谱时，iTRAQ试剂中的平衡基团发生中性丢失，信号离子表现为不同质荷比的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以得到同一蛋白在不同样本中的表达差异；同时，肽段的MS/MS结果结合数据库检索可以鉴定出相应的蛋白种类。”
“你特么是牙膏啊，挤一下冒一点，还有啥你能不能一口气给我说完？”
“还有，还有就是iTRAQ不同实验机器的区别、分级以及质谱时间对结果的影响、iTRAQ的串联质谱能打出多少蛋白以及数据的处理。”
“那你还不快说？”
“内什么，陈博啊，微信文章篇幅有限，要不先写这么多，其它的下次再写？”
“呦呵！长能耐啦！开始学会花式拖稿啦！看你下周搞出什么鸟来！”
“喳……”
