碱性磷酸酶标记试剂
BCIP／T是碱性磷酸酶最常使用的呈色底物，碱性磷酸酶标记的试剂应该用真核生物的碱性磷酸酶，因为这种酶容易被EDTA灭活。细菌酶难以终止其活性，易引起显色过度，导致较高背景。
BCIP／T底物在酶结合位点形成强烈的黑紫色沉淀，此反应是一个稳定进行的过程。因此，可设定一个精确的反应对照。可以通过孵育时间的长短控制反应的敏感性。
1．需要的溶液和特殊设备
碱性磷酸酶缓冲液：100retool／L NaCl，5mmol／L MgCl2，100mmol／L Tris(pH9．5)；
T溶液(0．5gT用10ml 70％DMF溶解，贮存在4C)；
BCIP溶液(0．5gBCIP[二钠盐]用10m1100％DMF溶解，贮存在413)；
20mmol／LEDTA用溶解，DPX。
光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)
2．操作步骤
(1)细胞染色前，准备3种贮存液：①T：用10ml 70％DMF溶解0．5gT；②BCIP：用10ml 100％DMF溶解0．5g
BCIP[二钠盐儿③碱性磷酸酶缓冲液：100mmol／LNaCl，5mmol／LMgCl2，100mmol／LTris(pH
9．5)。所有的贮存液置4C可保存1年。
(2)实验前，底物液新鲜配制。加66／ul T贮存液至10ml碱性磷酸酶缓冲液中，充分混合，加33ul BCIP贮存液，在1h内使用。
(3)将洗涤过的标本片放在一个适当的容器内。加足够量的底物液覆盖标本片(3～5ml适合于100mm平皿)。在室温中进行反应直到染色达到适当黑色。对一些试剂可在显微镜下定期监测。一般孵育时间大约是30min。
(4)在含有20mmol／LEDTA的中漂洗以终止反应，螯合Mg2+。
(5)优化：如果需要，进行复染。
(6)用水冲洗，DPX封片。
