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酸化丙酮/甲醇沉淀法实验

2019.3.28

TCA 沉淀的另一有用的替代方法是使用酸化的丙酮-甲醇混合液。酸化有助于通过将去垢剂溶于有机相而蛋白质产生沉淀以去除样品中的 SDS。丙酮和甲醇都能以任何比例溶解于水中，因此不会发生相分离。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

试剂、试剂盒	盐酸丙酮甲醇
实验步骤	材料盐酸（高纯；如 J,T-Baker 的 Ultrex 级) 丙酮（高纯；如 Aldrich 的金标级) 甲醇（高纯；如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售级) 操作程序本操作程序是根据 Current Protocolsin Molecular Biology —书改进而成的 1) 配制酸化丙酮：丙酮 120 ml HCl 10ul 混合，制成1mmol/L 溶液。 2) 配制沉淀剂：将等体积的酸化丙酮和甲醇混合在一起。置-20℃ 冰箱冷冻。 3) 真空离心，将蛋白质溶液浓缩至少于 0.1 ml。 4) 加入过 5 倍量（按体积）的沉淀剂于蛋白质水溶液。彻底混匀，在-20℃ 冰箱中孵育过夜。 5)4°C 下，用微型离心机的以最高转速离心 30 min。 6) 用精细的巴斯德吸管小心移去上清。沉淀物置通风橱中，用氮气吹 1h，至干。展开

试剂、试剂盒

盐酸丙酮甲醇

实验步骤

材料

盐酸（高纯；如 J,T-Baker 的 Ultrex 级)

丙酮（高纯；如 Aldrich 的金标级)

甲醇（高纯；如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售级)

操作程序

本操作程序是根据 Current Protocolsin Molecular Biology —书改进而成的

1) 配制酸化丙酮：

丙酮 120 ml

HCl 10ul

混合，制成1mmol/L 溶液。

2) 配制沉淀剂：将等体积的酸化丙酮和甲醇混合在一起。置-20℃ 冰箱冷冻。

3) 真空离心，将蛋白质溶液浓缩至少于 0.1 ml。

4) 加入过 5 倍量（按体积）的沉淀剂于蛋白质水溶液。彻底混匀，在-20℃ 冰箱中孵育过夜。

5)4°C 下，用微型离心机的以最高转速离心 30 min。

6) 用精细的巴斯德吸管小心移去上清。沉淀物置通风橱中，用氮气吹 1h，至干。

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周锦帆