糖解作用
在糖解作用中，此分子是2-磷酸甘油酸在烯醇化酶（enolase）的催化下生成，是一个高能磷酸分子。接下来磷酸烯醇丙酮酸将会进入糖解作用的第10个，也是最后一个步骤中。
在糖解作用的最后步骤里，磷酸烯醇丙酮酸将会经由丙酮酸激酶（Pyruvate kinase）的催化，使原本接在氧原子上的磷酸根转移到ADP上，进而生成ATP以及丙酮酸。这个反应会放出大量的能量，是一个难逆的反应，其标准自由能变化是31.4 kJ/mol（在pH=7、浓度55.5M的水中）。此外，这个反应也需要钾离子与镁离子（或其他二价阳离子）的参与。
推荐
