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测定肝、肾和肉中b-受体激动剂残留量实验

2019.9.14

气相色谱-质谱法

实验材料	肝肾肉
试剂、试剂盒	乙酸钠缓冲溶液美托洛尔高氯酸浓氢氧化铵溶液
仪器、耗材	离心瓶恒温箱三角漏斗水平振荡器固相色谱柱
实验步骤	1. 提取称取（10 ± 0.1）g经捣碎样品于一个100 mL离心瓶中，加入15 mL 的乙酸钠缓冲溶液（0.2 mol/L，pH 5.2），混合2 min。添加120 ng作为内标物的美托洛尔于全部肝、肾和肉的待测样品中。加50 uL的β-盐酸葡萄糖酸苷酶-芳基硫酸酯酶，加盖后超声振荡15 min。于恒温箱中37 ℃培养16 h。加入10 mL 0.1 mol/L的高氯酸，混合均匀并用11.7 mol/L的高氯酸（浓）调节pH值至1 ± 0.3。以4400 r/mL离心10 min后，将上清液经过塞有少许脱酯棉花的三角漏斗过滤至另一100 mL离心管中。用浓氢氧化铵溶液（浓度约17%）调节pH值至9.5 ± 0.3。用氯化钠饱和水相。分别用20 mL和15 mL的异丙醇-乙酸乙酯（6 + 4）混合溶液提取，每次混合2 min，于水平振荡器上振荡15 min,3000 r/min离心10 min。转移有机相至50 mL的旋转蒸发烧瓶中，于（45 ± 5）℃蒸发有机相至干。加入12 mL的磷酸盐缓冲溶液使蒸发残渣成为悬浮液后，以2000 r/min离心5 min。 2. 净化将C18小柱（500 mg，3 mL）和SCX小柱（500 mg，3 mL）按从上到下的次序装好。依次用5 mL水、5 mL甲醇和5 mL 0.03 mol/mL盐酸溶液以一定的流速过柱活化。转移溶液至固相色谱柱的顶部小心缓慢地抽吸固相色谱柱，此步操作至少需要10 min。用2 mL 1 mol/L的乙酸洗涤柱子到干后至少15 min，再用12 mL 甲醇在较强的负压下洗涤柱子至干后至少10 min。取下C18小柱。用12 mL混合均匀的乙酸乙酯-氢氧化铵（97 + 3，v/v）溶液，洗脱柱子上的待分析成分。通氮气在（40 ± 5）℃的加热块上蒸发洗脱液。加入200 uL甲醇，剧烈涡流摇动，溶解蒸发残渣。将溶液转移至反应玻璃小瓶中。再用200 uL甲醇溶解上一步未溶解完全的残渣，溶液合并于反应玻璃小瓶中。在温度（40 ± 5）℃的加热块上蒸发甲醇至干。 3. 衍生化反应加入100 uL的N，O-双（三甲基硅基）-三氟乙酸铵（BSTFA），并剧烈涡流摇动。将反应小瓶放置在（65 ± 5）℃的恒温箱中加热（30 ± 5） min。让小瓶和加热块冷却到室温后，通一小股氮气流蒸发至干。加入500L甲苯剧烈涡流摇动溶解蒸发残渣。溶液进入GC-MS分析。展开