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亲和层析的载体要求

2022.3.09

  理想的载体应具有下列基本条件:①不溶于水,但高度亲水;②惰性物质,非特异性吸附少;③具有相当量的化学基团可供活化;④理化性质稳定;⑤机械性能好,具有一定的颗粒形式以保持一定的流速;⑥通透性好,最好为多孔的网状结构,使大分子能自由通过;⑦能抵抗 微生物和醇的作用。

  可以做为固相 载体的有 皂土、 玻璃微球、石英微球、羟磷酸钙、 氧化铝、 聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、葡聚糖凝胶、 纤维素和 琼脂糖。在这些 载体中,皂土、 玻璃微球等吸附能力弱,且不能防止非特异性吸附。 纤维素的非特异性吸附强。 聚丙烯酰胺凝胶是优良载体。

  琼脂糖凝胶的优点是亲水性强,理化性质稳定,不受细菌和酶的作用,具有疏松的网状结构,在缓冲液离子浓度大于0.05Mol/L时,对 蛋白质几乎没有非特异性吸附。 琼脂糖凝胶极易被 溴化氢活化,活化后性质稳定,能经受层析的各种条件,如0.1Mol/L NaOH或1Mol/L HCl处理2h~3h及 蛋白质变性剂7Mol/L 尿素或6Mol/L 盐酸胍处理,不引起性质改变,故易于再生和反复使用。

  琼脂糖凝胶微球的商品名为Sepharose,含糖浓度为2%、4%、6%时分别称为2B、4B、6B。因为Sepharose 4B的结构比6B疏松,而 吸附容量比2B大,所以4B应用最广。

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